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细菌内毒素检查法 一、细菌内毒素检查法的定义： 本法是利用鲎试剂与 细菌内毒素产生凝聚反应的机理，以判断供试品中的细菌内毒素限度是否符合规定的一种方法。 二、背景介绍： 1、细菌内毒素 2、热原 3、鲎 1、细菌内毒素 细菌内毒素是一种革兰氏阴性细菌细胞壁的产物，当其死亡或菌体裂解时释放出的一类具有多种生物活性的毒性物质 特性： （1）.致热性：内毒素作用人体细胞，使之释放内源性热原，刺激下丘脑体温调节中枢，引起发热反应。 （2）.耐热性：需250度干热30分钟才能彻底灭活。 （3）.分子极性：多糖链亲水，脂肪链疏水，在水中呈不均匀分布。 （4）.鲎反应：能与鲎试剂发生多级酶促反应，形成凝胶。 2、热原 2.1热原是指临床上引起哺乳动物发热反应的物质 2.2 细胞分裂素（ IL-1, IL-2, IL-6, IL-8 ） 内源性热原 ｛ 产生细胞分裂素的物质 内毒素热原 外源性热原 ｛ 非内毒素热原（病毒、细菌、真 菌、抗体-抗原复合物、细胞分裂素） 2.3热原和内毒素的关系： 2.3.1热原是否就是内毒素？ 在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。 3、鲎 3.1鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫 (现在只有化石)一样古老的动物。鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。又具有很高的药用价值。 3.2鲎试剂 鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。鲎血液颜色呈蓝色，是因为鲎血浆的主要成分是血蓝蛋白。这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”。鲎试剂是由海洋生物鲎的血液提取物制成的“鲎试剂”，能够准确、快速地检测人体是否因细菌感染而致病；鲎试剂在制药行业中，用于检测细菌内毒素。目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。 三、2010年版药典细菌内毒素检查法介绍 整体结构 1. 综述部分 检查法的描述 试验的准备 限值（L）的确定 确定最大有效稀释倍数（MVD） 1.1细菌内毒素检查法介绍 细菌内毒素检查包括： 限量实验 浊度法 动态浊度法 凝胶法 ｛ 光度测定法｛ 终点浊度法 半定量实验 显色基质法 动态显色法 终点显色法 可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 1.2试验的准备 实验所需物品 细菌内毒素标准物质 细菌内毒素检查用水 凝胶法鲎试剂 漩涡混合器 适宜的恒温器 37± 1℃ 电热干燥箱 250 ℃ 实验器械等 1.3细菌内毒素标准物质 a 国家标准品 以内毒素国际标准品为基准标定效价。系自大肠埃系菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 150600-200707 10000EU/支 b 工作标准品 以内毒素国家标准品为基准标定效价。用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 150601-200968 150EU/支 1.4细菌内毒素检查用水 用于复溶内毒素标准品、稀释内毒素及样品、溶解鲎试剂等 a 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭