研究生-成功大学.docVIP

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研究生-成功大学.doc

研究生: 黃惠芝 研究生(英文姓名): Huey-Jy Huang 論文名稱: 塵蟎抗原對於週邊血單核球分化之樹突狀細胞分化及功能的影響 英文論文名稱: The Effect of House Dust Mite Allergen on the Differentiation and Function of Monocyte-derived Dendritic Cells 指導教授: 王志堯 指導教授(英文姓名): Jiu-Yao Wang 學位類別: 碩士 校院名稱: 國立成功大學  系所名稱: 微生物及免疫學研究所 學年度: 96 語文別: 中文 論文頁數: 59 關鍵詞: 分化 ; 塵蟎 ; 樹突狀細胞 英文關鍵詞: DC-SIGN ; differentiation ; dendritic cell ; Der p 被引用次數: 0 [ 摘要 ] 當過敏原進入人體組織時,樹突狀細胞會執行吞噬能力,將過敏原吞進細胞中進行抗原處理,並在淋巴組織中呈獻抗原給na?ve T淋巴細胞進行T細胞的分化與增生,此外也能活化週邊組織中的作用T細胞 (effector T cell)產生反應。呼吸道的樹突狀細胞能吞噬過敏原,造成宿主對過敏原產生過敏,誘導Th2免疫反應產生,使得呼吸道充斥嗜酸性白血球並造成發炎,此外亦能造成Th2作用細胞活化,徵募至發炎部位執行作用。但目前仍不清楚塵蟎 Der p對樹突狀細胞的分化及功能的影響。Dendritic cell-specific ICAM-grabbing nonintegrin (DC-SIGN, CD209) 為一種C-type lectin,透過carbohydrate recognition domain (CRD)能和具有mannose及fucose的醣化抗原做結合。先前在實驗室中發現到在台灣常見的過敏原塵蟎Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) 能和DC-SIGN結合 (binding)。因此,我們假設當未成熟樹突狀細胞藉著DC-SIGN和塵蟎Der p結合作用後會影響樹突狀細胞的分化,並且在成熟階段的樹突狀細胞藉DC-SIGN和塵蟎Der p作用時會誘導Th2免疫反應的產生。於是,我們利用過敏病人以及非過敏正常人週邊血中單核球,以GM-CSF、IL-4刺激細胞生長分化成未成熟樹突狀細胞 (medium-MDDCs);此外,在細胞激素刺激下,加入塵蟎 Der p共同培養,得到Der p-MDDCs,進行相關功能以及表現型的分析。在6-7天的分化過後,Der p-MDDCs表現較低比例的CD14-/CD1a+的樹突狀細胞,顯示Der p影響到樹突狀細胞的分化,但HLA-DR、CD80、CD86以及C-type lectin- MMR (macrophage mannose receptor) 卻與medium-MDDCs表現量並無差異性。然而在樹突狀細胞表面的DC-SIGN在Der p-MDDCs的表現量較medium-MDDCs來的低,並且過敏病人的DC-SIGN表現量也較正常人來的低。而在功能上的分析,首先於吞噬能力的觀察上,發現到Der p-MDDCs的吞噬能力較medium-MDDCs強,此外,過敏病人的吞噬能力也較正常人強。而於製造細胞激素的方面,未成熟樹突狀細胞以LPS刺激時會有大量的IL-10以及IL-12p40的分泌,但LPS結合Der p以及具刺激訊號能力的DC-SIGN單株抗體共同作用下和LPS相比較,會有IL-10分泌量增加以及IL-12p40分泌量減少的現象。進一步以自體的CD4+ T淋巴細胞和不同處理的樹突狀細胞共同培養,在LPS結合Der p、mannan以及 DC-SIGN抗體共同刺激的medium-MDDCs,相較於LPS刺激的細胞,有較強的能力誘導CD4+ T淋巴細胞表現GATA3 (Th2轉錄因子)。接下來探討Der p-MDDCs中DC-SIGN減少的原因,利用共軛焦顯微鏡實驗,可以觀察到FITC-Der p和未成熟樹突狀細胞共同培養,DC-SIGN會由細胞膜進入到細胞裡面,並和Der p有位置重疊的現象。這些實驗結果告訴我們,塵蟎 Der p和未成熟樹突狀細胞上的DC-SIGN結合作用下,會使得樹突狀細胞誘導走向Th2免疫反應。 [ 英文摘要 ] Dendritic cells (DCs) are crucial in determining the outcome of allergen encounter and integrating signals derived from the antigen into a

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