荧光定量PCR-HBV检测试剂盒-荧光PCR乙型肝炎病毒定量资料.PDFVIP

荧光PCR 乙型肝炎病毒定量诊断试剂盒 PCR-Fluorescence Quantity Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus 使用说明书 【前言】 本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）结合 Taqman 荧光探针技术，对血清中的乙型肝 炎病毒（Hepatitis B Virus）的特异性 DNA 核酸片段进行定量的检测，本品对 HBV 的检测 灵敏度为 500copy/ml (供研究使用)。 【规格】 20 人份，－20℃保存，有效期 6 个月 【试剂盒组成】 1 核酸提取液 600ul 5 阴性对照 (HBV) 10ul 6 HBV 定 量阳性对 照 1 10ul 号 1.0×106copy/ml 3 HBVPCR 反应液 480μ 7 HBV 定 量阳性对 照 2 10ul l 号 1.0×105copy/ml 4 混合酶 40 μl 8 HBV 定 量阳性对 照 3 10ul 号 1.0×104copy/ml 【适用仪器】 本试剂盒适用于 PE5700、7700、LightCycler、FTC-2000 等荧光 PCR 仪。 【标本处理和加样】 血清标本各取 30μl （冻存血清使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟），加入 30ul 核酸提取 液, 振荡混匀 10 秒种,100℃沸水浴 10 分钟，然后 12,000rpm 离心 5 分钟，最后取上清作 PCR 扩 增。处理后的样品应在 1 小时内使用，或在-20℃～-80℃最长保存 1 个月 （不宜反复冻融）。注： 定量阳性对照、阴性对照不要处理，可直接使用。 【试剂准备】 按样品数 （样品数＝血清标本数＋对照品数＋定量阳性对照 3 个）n 取 HBV PCR 反应液 n ×24ul、混合酶 n×2ul 混于一离心管中，旋涡振荡器上振荡混匀 10 秒，按每管 26ul 分装于反 应管中。将上述处理好的标本上清液和定量阳性对照 1 至 3 号 （务必振荡混匀数秒）各取 4ul 分别加入反应管中，混匀，低速离心数秒，立即进行 PCR 扩增反应。 【PCR 扩增】 PE5700、7700、icycler、FTC2000 荧光仪的程序设置先在 37℃反应 2 分钟，然后 93℃保温 5 分钟，再按 93℃30 秒→60℃60 秒 循环 40 次。 lightcycler 荧光仪的程序设置 1 热线电话：021－5446 0832 8009881995 E-mail:master@ 网址： 反应管置于 LightCycler 自动荧光 PCR 仪上，37℃反应 2 分钟，93℃2 分钟，再按 93℃5 秒→60℃30 秒 循环 40 次，每个循环的升降温速率为 20℃/S，每个循环在 60℃30 秒处进行荧 光检测设置。 【结果分析与判断】 1、 基线设定 1.1 PE5700、7700、FTC2000： 分析前把参比荧光定为TAMRA，如果没有Ct16 的强阳性标本，就选 3-15 个循环的平均荧光 10 信号为基线分析；如果有Ct16 的强阳性标本，就将此标本定为HBV DNA10 copy/ml，并将此 样品从数据库中剔除，再以 3-15 个循环的平均荧光信号为基线再分析Ct。 1.2 iCycler 基线一般按照 自设值 （2-10）即可，在实验结束后，选择PCR baseline substract选项扣除 基线值。若某些曲线出现了规则的剧烈的跳动，应视为非正常情况，将其从结果