第一章 FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群.pdfVIP

UniversitatisMedicinalisAnhui2014 ·1811· 安徽医科大学学报Acta Dec；49(12) FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群 刘锡娟，丁慧荣，田志华，韩海勃，张宏 d 摘要BGC823细胞瞬时转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒2 后，用FACSAria流式细胞仪分选GFP阳性和阴性BGC823 控试剂CST微球均购自美国BectonDickinson公司； 细胞亚群，检测其分选纯度并培养分选后细胞，观察其无菌 荧光显微镜激光共聚焦TCSSP5购自德国莱卡公 生长状态；商品化FITC直标抗体孵育SMMC7721细胞后， 司。 FACSAfia流式细胞仪分选FITC阳性和阴性细胞亚群。将 1．2方法 所有分选的细胞进行培养检测无菌状态，并观察细胞生长情 1．2．1 fluo— 况。FACSAfia流式细胞仪分选得到的GFP阳性细胞群的分 BGC823细胞转染绿色荧光蛋白(green resccnt cm 接种BGC823细胞至10 选纯度达99．6％，GFP阴性细胞群的分选纯度达98．8％，同 protein，GFP) x 细胞培养皿中，l 106细胞／孔，24 时激光共聚焦荧光显微镜显示分选后的GFP阳性细胞明显 h后，根据Lipo— fectamine 富集；分选后的BGC823细胞和SMMC7721细胞常规培养，2000说明书步骤，将pEGF．C1质粒转入细 细胞均无污染且生长状态良好。 胞，24h后换液，48 关键词流式细胞仪；无菌分选；高纯度 胞用0．25％胰酶消化成单个细胞，并悬浮于500斗1 中图分类号R331 1 XPBS溶液中，上流式细胞仪检测GFP表达阳性 文献标志码A文章编号1000—1492(2014)12—1811—05 率及分选，分选后将GFP表达阳性细胞及阴性细胞 收集于装有培养液的流式管中，再次流式分析检测 流式细胞技术普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤 分选纯度。 学、细胞生物学、细胞遗传学等临床和研究领 1．2．2 域¨。21。分选型流式细胞仪可将样本中的亚群分 复苏SMMC7721细胞至10cm细胞培养皿中，12 开，可同时对其中1～4种特定细胞进行超高速分 h后换液，24h后传代继续培养，待生长状态良好时 选。分选后的细胞可直接用于培养、移植、核酸提 用0．25％胰酶消化成单个细胞并收集，37℃孵育