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　　开口箭提取物细胞毒活性研究论文 【摘要】 目的通过体外细胞培养技术，探讨开口箭提取物的细胞毒活性，为进行深层次研究提供依据。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法。结果开口箭甲醇提取物、总皂苷、30%总皂苷和70%总皂苷对HL-60和Caski细胞的抑制作用显著，与阴性对照相比（P 0.05）,对HL-60细胞的抑制率达到60.12%，72.25%，89.09%，95.17%，其IC50为65.57.freell。对Caski细胞的抑制率达到63.94%，71.48%，62.49%，73.43%，其IC50为108.42，84.53，41.02，47.19 μg/ml。结论开口箭提取物对HL-60和Caski细胞具有明显的抑制作用。 【关键词】 开口箭； 皂苷； MTT法； 细胞毒活性 Abstract：ObjectiveTo observe the cytotoxicities of the extracts of Tupistra chinensis Bak. ethods on HL-60 and Caski tumor cells. ResultsThe inhibition effect of the extracts of Tupistra chinensis Bak., total saponins, 30% total saponins and 70% total saponins on HL-60 and Caski cells inent, pared odel group (P 0.05). Their inhibition ratios on HL-60 tumor cells l. Their inhibition ratios on Caski cells l. Conclusion The extracts of Tupistra chinensis Bak. have significant cytotoxicity on HL-60 and Caski tumor cells. Key ethod； Cytotoxicity 开口箭（Tupistra chinensis Bak.）系百合科Liliaceae铃兰族开口箭属植物，为著名的传统中药，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛等症，民间用于治疗咽喉炎、扁桃体炎等。现证明开口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用［1，2］。 本实验室通过实验证实湖北省产开口箭含有甾体皂苷和甾体皂苷元,且含量较高［3］。皂苷具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性,近年越来越受人们的普遍关注。有研究证实开口箭同属植物皂苷成分有细胞毒活性［4，5］。本文旨在通过体外抗肿瘤实验,观察开口箭提取物对HL-60和Caski细胞的细胞毒活性,现报告如下。 1 材料 1.1 细胞株人急性淋巴细胞性白血病细胞（HL-60）、人宫颈鳞状上皮癌细胞(Caski)均由三峡大学免疫教研室提供。 1.2 药品与仪器RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；新生小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品；HEPES为美国Sigma公司产品，胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品；四氮唑蓝(MTT)为美国AMRESCO公司产品；丝裂霉素 (MMC，浙江海正药液股份有限公司，批号：051211)；酶联免疫检测仪(GENIOS TECAN)；CO2培养箱（日本三洋公司）；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)；96孔板(美国Cornning公司)。 开口箭根茎于2002-07采自湖北省神农架林区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为Tupistra chinensis Bak.，标本存放于湖北省天然产物研究与利用重点实验室（编号：TC200207SNJ）。 1.3 药物制备开口箭根茎粉碎后，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，浓缩后经石油醚脱脂用水饱和的正丁醇萃取，旋转蒸发回收正丁醇，浓缩液抽干后即得到开口箭总皂苷，配成水液，过大孔树脂柱，水洗， 30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，得开口箭四部分皂苷。 分别取开口箭甲醇提取物、开口箭总皂苷、30%开口箭皂苷、70%开口箭皂苷4个样品，用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配制成所需浓度，依次为62.5,125,250,500,1 000,2 000 μg/ml。丝裂霉素(MMC)用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配置为250 μg/ml。所有受试样品均用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌。 2 方法 2.1 细胞培养HL-60 和Caski细胞用RPMI-1640培养液（另加10mmol/L HEPES,2.0 mg/ml Na