免疫捕获PCR检测进境苹果果实中梨火疫病菌.pdfVIP

2010年第 1期 植物检疫 PLANTQUARANTINE 免疫捕获 PCR检测进境苹果果实中梨火疫病菌 何丹丹 周 国梁 陈仲兵 印丽萍 徐殿胜 易建平。 (1．华东理工大学生物工程学院 J：海 200237 2．上海出入境榆验榆疫局) Detection ofErwiniaamylovorainimportedapplefruitbyimmuno—capturePCR．HeDandan ，ZhouGuo— liang，ChenZhongbing，YinLiping，XuDiansheng，YiJianping (1．EastChinaUniversityofScienceand Technology，Shanghai200237，China；2．ShanghaiEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Shanghai 200135，China) Abstract Theimmuno—capturepolymerasechainreaction (IC—PCR)techniquebycombiningimmuno—cap— tureofthebacteriaandpolymerasechainreaction(PCR)amplificationofitsamsGgenewasdevelopedfordirect detectionofErwiniaamylovorainimportedapplefruitswiththesensitivityofthedetectionaslow as150cfuinar— tificialcontaminatedsamples．Thislevelofdetectionsensitivityofatleast10foldoverdirectPCR wasconfirmed inartificialapplesampleswiththeadvantageofnotrequiringDNA extractionstepswhilestillallowinganaccurate diagnosisofErwinia amylovora．ThesuccessfuldetectionofrErwiniaamylovorainimportedapplesampleindica- tedthatthisIC——PCR assayissuitableofrthelarge——scalescreeningErwiniaamylovorawithagreatpotentialto beusedofrroutineapplesampleassay． Keywords Erwiniaamylovora；immuno—capturePCR ；detection 摘要 利用梨火疫病菌抗体和 PCR技术建立 了梨火疫病菌免疫捕获PCR方法，检测苹果模拟样品的 灵敏度达到了1．5×10 cfu／reaction。与直接 PCR进行 比较，免疫捕获PCR方法检测苹果模拟样 品的灵敏 度提高了l0倍以上，而且省去了DNA提取等步骤。利用该方法成功从进境苹果样品中检测到梨火疫病 菌，产物测序结果表明，产物序列和梨火疫病菌的相应序列高度一致。试验结果表明，免疫捕获PCR法能 除去样品中的大部分PCR反应抑制物质，可以有效检测进境苹果中梨火疫病菌，在 口岸水果检疫中具有一 定的应用潜力和推广价值。 关键词 梨火疫病菌；免疫捕获PCR；苹果 中图分类号 $436．61，$41—30 梨火疫病是 由解淀粉欧文氏菌(Erwiniaamylo— 苗木和接穗、带菌水果和包装材料、迁徙候鸟等是 vora)引起的一种极具毁灭性的细菌病害。1780年 病菌远距离传播的介体 J。 目前对病原菌的检测 首次发生于美 国，随着 国际贸易的迅速发展而陆续 主要是针对苗木、枝条或幼果等样 品 ， ，进境商 向世界各 国扩散 ，1920年在新西兰发现 ，1957年又 用苹果果实中梨火疫病菌检测的报道较少。常用 在英 国被报道 。此后，在欧洲各 国均有发生 。目前 的检测方法包括 ：选择性培养基分离、酶联免疫吸 其分布范围包括北美、中美、欧洲 、西亚、新西兰、非 附分析(ELISA)、免疫荧光、DNA探针杂交、PCR检 洲 (埃