CHIP流程中文版.docVIP

按照Nature Protocol 2008整理 取材：根尖0.5cm约4g（~80皿双排种）/2 g花/ 4g叶子 交联：加入37ml 交联缓冲液（GB buffer），其中含1ml 37%甲醛，370ul 100mM PMSF，这两个现用现加。取根尖的话先把剪下的根泡在含PMSF的GB buffer中，取材完毕再加入甲醛和PMSF。 真空抽气10min，抽气力度慢慢调大，前5min不时停下晃匀，以免材料贴壁 停止交联：加入2.5ml 2M甘氨酸，真空抽气5min 提核：用蒸馏水清洗材料，然后用滤纸把水吸干。研磨材料，加入25ml预冷的提核缓冲液（nuclei isolation buffer），其中PMSF和cocktail现用现加。 用滤膜过滤研磨得到的液体，单层过滤2次 滤出液4℃ 11000g离心20min 核裂解：弃上清，向沉淀加入1ml 预冷的核裂解液（nuclei lysis buffer加入PMSF和cocktail），重悬，将重悬液转入新的1.5ml EP管中。因为异丙醇可以消气泡，所以PMSF可以最后再加以消除重悬时吹吸引起的气泡 超声破碎：将EP管放在EP管架上并泡在冰水混合物中，超声条件：200W 15S 5次。中间间隔60-80s。 4℃ 13800g离心10min。上清可冻于-80℃，也可继续下面流程。 ------------------------