多柔比星透明质酸纳米颗粒对口腔鳞状细胞癌作用论文.docVIP

　　多柔比星透明质酸纳米颗粒对口腔鳞状细胞癌作用论文 张晓燕 金晓明 刘晨光 【摘要】 目的 探讨多柔比星透明质酸纳米颗粒于体外靶向杀伤口腔鳞状细胞癌的作用。方法 在体外培养的口腔鳞状细胞癌细胞中分别加入多柔比星浓度为0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L的多柔比星透明质酸纳米颗粒，利用体外细胞毒实验四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测多柔比星透明质酸纳米颗粒对肿瘤细胞的靶向杀伤作用；多柔比星浓度为5.0、10.0 mg/L时分别作用0、6、12、24、48 h后，利用流式细胞仪检测其对肿瘤细胞凋亡影响。结果24、48 h 细胞毒实验显示，多柔比星透明质酸纳米颗粒对肿瘤细胞的杀伤作用优于游离多柔比星(t=5.78～42.05,P 0.01)。相同浓度多柔比星透明质酸纳米颗粒细胞凋亡百分率随时间延长而升高（F=4 200.40、4 775.36,P 0.01）,相同作用时间细胞凋亡率随浓度增加而升高（t=12.06～20.08，P 0.05)。结论 多柔比星透明质酸纳米颗粒可特异性识别肿瘤细胞，并实现其杀伤作用，而且随时间延长杀伤作用增大。 【关键词】 多柔比星；纳米结构；肿瘤,鳞状细胞；药物释放系统;药物疗法 多柔比星（ADM）是临床常用的抗恶性肿瘤药，但长期使用有很强的毒性作用1。纳米生物材料可大大提高药物载体的靶向性, 降低药物的毒副作用2。将透明质酸（HA）与多柔比星联合制成纳米颗粒.freelg，浙江海正药业股份有限公司），胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT，Sigma公司），倒置相差显微镜（日本奥林巴斯公司），Rainbog的AHAN溶于1 mL双蒸水，浸泡24 h，超声粉碎颗粒，此时ADM浓度为156 mg/L，高压灭菌备用。 1.3.3 细胞形态学观察及MTT比色法培养 将检测细胞以5×107/L 接种到96 孔培养板中,每孔均为0.1 mL,待细胞生长融合为单层后, 分别加入AHAN（AHAN组）、游离ADM（游离ADM组） 和RPMI 1640工作液(空白对照组)，AHAN、ADM组按ADM浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L设4组，每组设4个平行组。空白对照组加等量RPMI 1640工作液。分别培养24、48 h 后于倒置显微镜下观察细胞形态的改变。MTT 法计算存活率,细胞存活率＝试验组吸光度值/对照组吸光度值×100％,测定波长为570 nm。 1.3.4 流式细胞仪测定细胞凋亡率 将细胞以1×108/L接种于6孔板中，待细胞贴壁后，分别将5、10 mg/L的HAADMSSL作用于细胞0、6、12、24、48 h后，将细胞用2.5 g/L胰酶EDTA消化、离心收集，0.01 mol/L PBS （pH 7.4）洗2次，3 000 r/min 离心5 min，体积分数0.70冷乙醇固定细胞，加含RNA酶PI染液4 ℃作用30 min，过网，调细胞浓度至109/L，流式细胞术检测细胞凋亡率。 1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0及PPMS 1.53统计分析软件对数据进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析，P 0.05认为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 各组细胞形态的变化 加药24 h后，空白对照组细胞形态无明显变化；游离ADM组和AHAN组均可见部分鳞状细胞癌细胞收缩，细胞变小变圆，有突起相互牵连，在细胞表面出现多数暗色颗粒，AHAN组同时可见细胞散在脱落。加药48 h后，游离ADM组可见细胞多数收缩， AHAN组可见细胞几乎完全脱落，呈散在存在。 2.2 各组细胞存活率比较 培养24、48 h两组相同浓度细胞存活率比较差异有显著性(t=5.78～42.05,P 0.01)。见表1。 2.3 流式细胞术检测 相同浓度的AHAN细胞凋亡率随时间延长而升高（F=4 200.40、4 775.36,.freelg/L作用0 h两组间细胞凋亡率无显著差异（t=0.20,P 0.05）,分别作用6、12、24、48 h两组凋亡率差异有显著性（t=12.06～20.08,P 0.05）。见表2。 表1 两组培养24、48 h细胞存活率比较（略） 表2 不同浓度的AHAN对口腔鳞状细胞癌细胞凋亡率的影响（略） 3 讨论 肿瘤的靶向治疗是指借助各种对肿瘤细胞有选择性亲和作用的物质作为载体，将药物定向作用于肿瘤组织而不损伤正常组织细胞的治疗方法。纳米靶向载体是一类天然高分子物质或合成高分子材料制成的粒径为纳米级的载体，其表面经过生物修饰或理化修饰后具有靶向作用，能够高选择性地到达癌细胞并作用于癌细胞内外的小分子或基因物质。配体受体结合是体内一种特殊识别机制, 具有高特异性、高选择性和高亲