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基因工程习题及参考答案02 工具酶部分——限制性内切核酸酶 一、填空题 1．严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是的酶。基因工程中把那些具有识别的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。 2．年Luria 和Human 在T 偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的现象。 3．1970 年，Smith 和Wilcox 从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA， 这个酶后来被命名为，这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片 段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的。 5．Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20~40kDa，通常由亚基所组成。 它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA 杂合双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有，产生末端的DNA 片段或的DNA片段。作用时需要作辅助因子，但不需要和。 6．完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)(2) 。 7．Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析， 限制性内切核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中含量较高。 8．EcoK 是I 类限制性内切核酸酶，分子组成是α2 β2 γ，分子量300kDa。在这些亚基中，α亚基具有作用；β亚基具有的活性；γ亚基的作用则是。 9．个体之间DNA 限制性片段长度的差异叫 。 10．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、第三两个字母取自，第四个字母则用表示。 11．限制性内切核酸酶Acy I 识别的序列是5’—GRCGYG-3’，其中R，Y。 12．在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2 秒钟，其目的是和。 13．部分酶切可采取的措施有：(1) (2) (3) 等。 14．第一个分离的限制性内切核酸酶是；而第一个用于构建重组体的限制性 内切核酸酶是。 15．限制性内切核酸酶BsuRI 和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是， 它们属于。 16．由于DNA 是由4 种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该 是。 17．Sal I 和Not I 都是哺乳动物中识别序列稀有的酶，在哺乳动物基因组的5kb 片段中，找 到NotI 切点的概率是。 18．部分酶切是指控制反应条件，使得酶在DNA 序列上的识别位点只有部分得到切割，它 的理论依据是。 19．I 类限制酶识别DNA 的位点和切割的DNA 位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是，另一种是。 20．限制性内切核酸酶通常保存在浓度的甘油溶液中。 二、判断题 1．限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA 的修饰和对自身DNA 的限制实现的。 2．限制性内切核酸酶在DNA 中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA 需要更多的酶，最高的需要20 倍。 3．如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA 分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如HpaⅡ和MboI 要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。 4．能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。 5．限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。 6．用限制性内切核酸酶HaeⅢ分别切割载体DNA 和供体DNA 后，可用E．coli DNA 连接酶进行连接。 ， 7．已知某一内切核酸酶在一环状DNA 上有3 个切点，因此，用此酶切割该环状DNA,可得到3 个片段。 8．迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。 9．基因工程中使用的Ⅱ类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。 10．DNA 多态性就是限制性片段长度多态性。 11．用限制性内切核酸酶PstI 切割质粒pBR322 后，再用外切核酸酶ExoⅢ进行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。 12．甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5％以下。 13