普通小麦-簇毛麦2V染色体端体异附加系的选育与鉴定.pdfVIP

普通小麦-簇毛麦2V 染色体端体异附加系的 选育与鉴定1 李淑梅，徐川梅，周波，陈佩度 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏南京（210095 ） E-mail：pdchen@ 摘 要: 簇毛麦（Haynaldia villosa ）具有抗多种病害、耐旱、耐寒等优良性状，是可供小麦 改良利用的优良遗传资源。本研究综合利用根尖细胞有丝分裂中期染色体Giemsa C-分带、 花粉母细胞减数分裂中期I 染色体构型分析、荧光原位杂交（Genomic in situ hybridization, GISH ）和分子标记等技术，从普通小麦-簇毛麦2V （2D ）异代换系与含有Ph 抑制基因的中 国春高配对材料（Pairing homoeologous inhibitor, PhI ）的杂交后代中选出分别含有簇毛麦2V 长臂和短臂的普通小麦-簇毛麦2V 端体异附加系。将控制护颖颖脊刚毛性状的基因进一步定 位在簇毛麦2V 染色体的短臂上。同时筛选出可以追踪2V 染色体短臂的SSR 标记wmc25 。 关键词：普通小麦; 簇毛麦; 端体异附加系; 染色体C-分带；荧光原位杂交；SSR 簇毛麦 (Haynaldia villosa) 属于禾本科 (Gramineae) 小麦族 (Triticeae) 簇毛麦属 (Haynaldia Shar.) ，具有抗白粉病、抗锈病、抗梭条花叶病、抗全蚀病、分蘖力强、小穗数 多、耐旱及籽粒蛋白质含量高等优良性状[1] 。簇毛麦最明显的形态特征是在护颖颖脊上簇生 刚毛。普通小麦-簇毛麦 2V 异附加系和 2V （2D ）异代换系护颖颖脊上簇生刚毛，表明该基 因位于 2V 染色体上[2] 。由于该性状是一个十分明显而稳定的表型性状，易于观察和用作遗 传分析，所以本研究试图利用携有来自Ae. speltoides 高配对基因的 PhI [3] 材料 来诱导 2V 染 色体产生结构变异，并在此基础上将簇毛基因定位在特定的染色体区段。 1. 材料和方法 1.1 试验材料 I 小麦-簇毛麦 2V （2D ）异代换系和含Ph 基因（Pairing homoeologous inhibitor gene ）的 中国春高配对材料 C04-13 均由南京农业大学细胞遗传所提供。本实验于 2003 年春配制 2V （2D ）异代换系与含有PhI 高配对基因材料的杂交，诱导 2V 染色体结构变异。 1.2 试验方法 1.2.1 Giemsa C-分带 种子置 20℃培养箱中发芽，待根长至 1~2cm 时剪取根尖，在 0℃冰水中处理 22~24h 后， 用卡诺氏固定液（3 份 95%乙醇：1 份冰醋酸）固定，置冰箱中保存备用。2~7d 后在 45%醋 酸中压片。于花粉母细胞（PMC ）减数分裂期挑取含中期I (MI) 分裂相的花药，用卡诺氏 固定液固定， 2~7d 后用醋酸洋红染色、压片，观察染色体配对构型。Giemsa C-分带方法 参照 Gill 和 Friebe[4]程序。 1.2.2 荧光原位杂交 根尖细胞有丝分裂中期和花粉母细胞减数分裂中期 I 染色体的荧光原位杂交参照陈佩 度等[5] [6] 和 Jiang 等 的程序，略有改动。用绿色荧光素标记的簇毛麦基因组DNA 作探针，在 450~490nm 波长下，簇毛麦染色体呈绿色，小麦染色体呈红色。在 Olympus 荧光显微镜下 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（20030307037 ）和长江学者和创新团队发展计划的资助。 -1-