第三章病毒概念.ppt

二、毒粒的化学组成 2、病毒的蛋白质 病毒结构蛋白的主要生理功能： 1）构成蛋白质外壳，保护病毒核酸免受核酸酶及其它理化 因子的破坏； 2）决定病毒感染的特异性，与易感细胞表面存在的受体具 特异性亲和力，促使病毒粒子的吸附和入侵； 3）决定病毒的抗原性，能刺激机体产生相应的抗体； 4）构成毒粒酶，或参与病毒对宿主细胞的入侵（如T4噬菌 体的溶菌酶等），或参与病毒复制过程中所需要病毒大分 子的合成（如逆转录酶等）； 一般来说，病毒是不具酶或酶系极不完全的，所以 一旦离开宿主就不能独立进行代谢和繁殖。 第三节 病毒的复制 病毒的特点： 严格细胞内寄生物，只能在活细胞内繁殖。 毒粒 宿主细胞 有繁殖性的病毒基因组 具有感染性的毒粒消失 病毒基因组复制、表达 病毒核酸和蛋白质 装配形成具有感染性的毒粒 释放至细胞外 原料； 能量； 生物合成场所； 第三节 病毒的复制 病毒的复制： 病毒感染敏感宿主细胞后，病毒核酸进入细胞，通过其复制与 表达产生子代病毒基因组和新的蛋白质，然后由这些新合成的 病毒组分装配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式释放到 细胞外。病毒的这种特殊繁殖方式称做复制（replication）。 第三节 病毒的复制 一、病毒的复制周期 1、一步生长曲线（one step growth curve） 1939年，Max Delbruck Emory Ellis： E. coli / bacteriopage 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3、将上述混合物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放 的噬菌体感染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量 进行计数）； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘制出 病毒特征性的繁殖曲线； 该实验标志着分子病毒学、分子生物学和分子遗传学的建立 Max Delbruck因此荣获1969年Nobel Prize 一、病毒的复制周期 1、一步生长曲线（one step growth curve） 噬菌体复制（繁殖） 的三个阶段： 1、吸附期； 游离的噬菌体吸附到宿主细胞 2、潜伏期； 从噬菌体吸附到细胞到释放 出新噬菌体的最短时期 3、裂解期； 随着菌体不断破裂，新噬菌体 数目增加，直到最高值 一、病毒的复制周期 1、一步生长曲线（one step growth curve） 取培养物直接测定 病毒数量 将培养物过滤去细 胞后测定病毒数量 将细胞裂解后测定病毒的数量。 前期可将培养物先离心去上清以消除未吸附病毒 的影响 裂解量：每个受染细胞所产生的子代病毒颗粒的平均数目。 其值等于潜伏期受染细胞的数目除以稳定期受染细胞所释放的全部子代病毒数 目，即等于稳定期病毒效价与潜伏期病毒效价之比。 一、病毒的复制周期 2、隐蔽期（eclipse period） 在潜伏期的前一段，受染细胞内检测不到感染 性病毒，后一阶段，感染性病毒在受染细胞内 的数量急剧增加。 自病毒在受染细胞内消失到细胞内出现新的感 染性病毒的时间为为隐蔽期。 隐蔽期病毒在细胞内存在的动力学曲线呈线性函数，而非指数关系，从而证明 子代病毒颗粒是由新合成的病毒基因组与蛋白质经装配成熟，而不是通过双分 裂方式产生的。 不同病毒的隐蔽期长短不同， 例如，DNA动物病毒的隐蔽期为5～20小时， RNA动物病毒为2～10小时。 一、病毒的复制周期 1、一步生长曲线（one step growth curve） 一步生长曲线是研究病毒复制的一个经典试验，最初是为研究噬菌 体的复制而建立，以后推广到动物病毒和植物病毒的复制研究中。 以适量的病毒接种于标准培养的高浓度的敏感细胞，待病毒吸附后，离心除去 未吸附的病毒，或以抗病毒抗血清处理病毒—细胞培养物以建立同步感染，然 后继续培养并定时取样测定培养物中的病毒效价，并以感染时间为横坐标，病 毒的感染效价为纵坐标，绘制出病毒特征性的繁殖曲线，即一步生长曲线。 不同病毒的潜伏期长短不同，噬菌体以分钟计，动物病毒和 植物病毒以小时或天计。 潜伏期： 噬菌体的裂解量一般为几十到上百个，植物病毒和动物病毒可达 数百乃至上万个。 裂解量： 一、病毒的复制周期 3、病毒的复制周期 复制周期（replicative circle）或称复制循环： 自病毒吸附于细胞开始，到子代病毒从感染细胞释放到细胞 外的病毒复制过程。 ① 吸附； ② 侵入； ③ 脱壳； ④ 病毒大分子的合成，包括病毒基因组的表达与复制；