发光免疫检测技术的临床应用及其应注意的问题.pptVIP

同一干扰因素对不同检测方法的不同影响 待测物 包被（结合） 抗体 放免法 免放或发光法 标记抗原 TBG 离心沉降 洗 涤 祛 除 以甲状腺素结合蛋白（TBG）干扰竞争法测定T3为例 信号↑ 结果↓ 信号↓ 结果↑ 使用商品化发光免疫分析产品 必须做好的几个工作 在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。 明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况 如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉 胰岛素与C-肽、胰岛素原之间的交叉 FSH、LH、HCG之间的交叉。 充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰） （可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到） 自行建立多点质控（2-3点）监控每次实验的准确性。 尽可能避免干扰因素 采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检 实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修 正常值参考的意义及灰色区域的存在 如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内20%）内，则需要进一步追踪检查。 95%或99% -20% +20% 自身基础数据 ——最佳“正常参考值” 对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，即自身对照； 因此积累病人的基础数据非常重要。 尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。 时间 FSH 卵泡期 排卵期 黄体期 月经期 正常人平均值变化规律 正常参考值范围 某一患者变化规律（无排卵峰） 保证检验结果准确性的 对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释 不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断 建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度 检验医师 必须牢记 检验医师给临床所提供的一切服务仅限于 化验结果与临床不符的原因 由于个体差异或不明干扰因素的存在，总有少数病例的化验结果与其临床表现不符 操作失误、 仪器故障、 试剂失活等因素 某些夹心一步法试剂 往往存在前滞效应 药物以及其它 基础疾病的干扰 排除这些因素后 重复测定或重复送样 用同试剂盒的校准品A 稀释后再重新测定 及时与临床沟通 结合说明书综合判断 原因 解决 不同实验方法， 或同一方法的不同厂家产品之间， 其测定结果和临床正常值都会有所差异 不同实验室环境和不同人群条件下， 其测定结果和临床正常值也会有所不同 在厂家提供的正常参考值基础上 建立自己的正常参考系统 待测物质的降解 及其与血清蛋白结合状态的改变， 某些化验项目的检测结果往往受 标本存放时间及其贮存条件的影响 及时采样、送检， 实验室及时完成化验， 严格按照试剂盒说明书要求存放 常见临床免疫检测指标的意义 及其限制因素 激素类型 氨基酸：甲状腺激素 蛋白（肽）：甲状旁腺激素、 下丘脑激素、 垂体激素、 降钙素、 胎盘激素、 心肌激素、 胃肠激素 类固醇：性激素和皮质激素 儿茶酚胺：肾上腺素 下丘脑-垂体-内分泌轴及其调节关系 长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞 分泌激素的反馈调节，以负 反馈为主，但排卵时雌激素 为正反馈。 短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈 负反馈 超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈 自身的合成和分泌 类固醇激素的合成 男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。 甲状腺功能指标评价 甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4 甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3 发光法TSH、FT3 、 FT4提高了灵敏度，使得其临床意义大于TT4和TT3 两步法 操作时间长 灵敏度差 准确性差 类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好 反向竞争法 （标记抗体） 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好 第一代 第二代 第三代 血清FT3 、 FT4试剂盒的发展 （消除结合蛋白对测定的影响） TGAb TMAb =TPO抗体 其生理作用需要通过生长介素(SM)介导 SM也称胰岛素样生长因子(IGF)，主要在肝脏及多种GH靶细胞合成 SM-C即IGF I，结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。 生长激素（GH） 生长激素紊