《分析化学》第十四章高效液相色谱法.ppt

怎样学习有机化学 第十四章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatography； HPLC 第十四章 高效液相色谱法 第一节 概述 第二节 基本原理 第三节 高效液相色谱法的主要类型 第四节 高效液相色谱仪 第五节 高效液相色谱法的应用 思考与练习 第一节 概述 高效液相色谱法（HPLC） －－以高压液体为流动相的液相柱色谱法。 又称为高压液相色谱法；高速液相色谱法。 第一节 概述 一、 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较 经典液相色谱法为基础，引入气相色谱法的理论和实验技术; 高压输送流动相，流速快，分析速度快； 高效固定相，颗粒极细(一般为10μm以下)、规则均匀的固定相 (键合相),传质阻抗小，柱效高，分离效率高； 高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10?-9g，而荧光检测器最小检测限可达10?-12g。 第一节 概述 二、 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广； 可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高； 一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。 特点： 高压、高效、高速、高灵敏度、适用范围广 适用： 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析。 第二节 基本原理 一、 柱内展宽 二、 柱外展宽 高效液相色谱法对基本概念和理论 如塔板理论、速率理论、保留值与分配系数的关系、分离度等与气相色谱法基本一致， 由于流动相分别为液体和气体，两者的扩散系数和粘度差别较大，因而在应用色谱基本理论时，必须考虑本身的特点。 其中最重要的是速率理论中，各种动力学因素对高效液相色谱峰展宽带影响与气相色谱中有所不同。 这种影响可分为柱内因素和柱外因素二类 一、 柱内展宽——是由色谱柱内各种因素所引起的色谱峰扩展， 依据速率理论（即Van Deemter 方程）H=A+B/ u +Cu 来讨论 与GC同（略） 二、 柱外展宽 柱外展宽—色谱柱外各种因素引起的峰展宽。 柱外因素主要指低劣的进样技术和包括进样器连接管、接头、检测器在内的管路体积（死体积）。死体积越大，对色谱峰展宽影响越大。 为了减少柱外因素对峰宽的影响，必须尽量减小驻外死体积。如采用进样阀进样，使用“零死体积接头”连接管路各部件，并尽可能使用内腔体积小的检测器。 第三节 高效液相色谱法的主要类型 分配色谱法(partition hromatography) 吸附色谱法(adsorption chromatography) 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC） 化学键合相色谱法(bonded phase chromatography. BPC) 胶束色谱法(micellar chromatography；MC) 第三节 高效液相色谱法的主要类型 液-液分配色谱法又可以分为 正相液-液分配色谱法(normal-phase liquid- liquid partitionn hromatography, NLLC) 反相液－液分配色谱法(reversed-phase liquid- liquid partition chromatography ,RLLC) 第三节 高效液相色谱法的主要类型 一、 液-固吸附色谱法 (一) 液-固吸附色谱法的固定相 1.硅胶 表孔硅胶、全多孔硅胶、堆积硅珠 (1)全多孔硅胶 优点：表面积大，容量大 缺点：孔径深，传质阻力大 无定形全多孔硅胶(YWG)：粒径5～10um，理论塔板数每米2～5万，价格便宜、载样量大，但渗透性差 球形全多孔硅胶(YWG)：粒径3～10um，理论塔板数每米8万，涡流扩散项小，渗透性好。 第三节 高效液相色谱法的主要类型 (2)堆积硅珠(YQG) 由二氧化硅溶胶加凝结剂聚合而成。粒径3～5um，理论塔板数每米8万，传质阻力小，柱容量大，是一种好的高效填料 2.高分子多孔微球(YSG) 又称有机胶，表面为芳烃官能团，由苯乙烯与二乙烯苯交联而成 用于分离芳烃、杂环、甾体、生物碱、脂溶性维生素、酚、醛、醚等。柱效低，但选择性好，峰形好。 第三节 高效液相色谱法的主要类型 (二) 液-固吸附色谱法的流动相 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 流动相的选择 应重点考虑溶剂的极性 溶剂的极性强弱可用Snyder提出的溶剂极性参数ε0来表示。ε0为溶剂分子在单位吸附剂表面的吸附自由能。ε0越大，说明溶剂的极性越强，洗脱能力就越强。 第三节 高效液相色谱法的主要类型 分类 流动相按组成不同可分为单组分和多组分； 按极性可分为极性、弱极性、非极性； 按使用