USP 35 113中文版.docVIP

自己翻译，非专业，有错误改正，勿拍砖 〈1113〉细菌鉴定 35（1）版 167页，该章包括标题正在修订。本章微生物鉴定方法，方法验证。 微生物特性确定、鉴定及菌株分型 在检测药品原辅料，生产用水，生产环境，中间体以及终端产品市的微生物时，需要对其特性进行确定。这些包括适当的鉴定及菌株分型微生物特性确定氧化酶，过氧化氢酶，凝固酶从失败的无菌工艺模拟收回微生物鉴定系统是基于不同的分析方法，鉴定是通过一个既定的标准菌株匹配特性（基因型和/或表型）。在USP通用测试章特别提到非无菌产品微生物检验：62，这一章表示用于鉴定实验确认的微生物需要通过选择培养基或者特征培养基培养并具有确定的形态特征。同样，在USP通用测试章71中规定：在从试验中分离出的微生物确定之后，此种（或这些种）微生物的生长可以毫不含糊地归咎于与物料和/或者进行无菌试验过程中所使用的方法，该实验无效。USP通用测试章1116中提到微生物菌群鉴定能有效支持环境监测。 单菌落分离 菌种鉴定第一步是分离得到单个纯培养菌落。一般采用平板划线法，通过四分之一区划线的方法，在常用的适宜的固体培养基上划线，得到单个菌落，这就是微生物的纯培养。成功鉴定步骤还需要表型表达和有效的接种。分析员必须认识到分离菌的来源、培养基的选择性和生长条件都会影响微生物表型表达如细胞大小，形态，芽孢形成，细胞组成，抗原性，生化反应和对抗菌剂的敏感性（见表1）. 表1 表型特征用于微生物分类学 Categories Characteristics Culture Colony morphology, colony color, shape and size, pigment颜料，色素 production Morphological 形态 Cellular morphology, cell size, cell shape, flagella鞭毛 type, reserve保存 material, Gram reaction, spore孢子 and acid-fast staining抗酸染色, mode of sporulation产胞方式 Physiological生理特性 Oxygen tolerance耐氧性, pH range, temperature optimum最适宜 and range, salinity tolerance 抗盐性 Biochemical Carbon utilization碳利用率 carbohydrate oxidation or fermentation糖的氧化还原反应, enzyme patterns酶反应 Inhibition抑制 Bile salt-tolerance胆盐耐受, antibiotic susceptibility抗生素的敏感性, dye tolerance Serological血清 Agglutination凝集反应, fluorescent antibody免疫荧光抗体反应 Chemo-Taxonomic 化学分类 Fatty acid profile脂肪酸谱, microbial toxins微生物毒素, whole cell composition 全细胞组成 Ecological生态学 Origin of the organism机体起源 因此，鉴定用的培养基和细菌的传代次数都会影响表型鉴定特征用于微生物分类学 Categories Characteristics Genotypic DNA base ratio (G + C content量)碱基比率, restriction fragment patterns, and DNA probes限制性片段型态，和DNA探针 Phylogenetic DNA–DNA hybridization杂交, and 16S and 23S rRNA codon sequences密码子序列 如伯捷氏细菌手册系统细菌学(伯捷氏细菌手册)细菌的分类是目前基因材料的对比分析来完成的。基因型的识别(表2)是通过使用DNA杂交,限制性片段模式比较,和/或DNA探针。聚合酶链反应(PCR)放大基因,然后使用电泳测序或双脱氧链终止法比较可以使用验证专数据库或那些公开可用公 革兰氏染色包括四步：结晶紫（基础染色），碘液（助染），酒精或酒精丙酮革兰氏阴性细菌保留结晶紫在某些情况下酒精固定会更一致的革兰氏染色结果。 使用孔雀绿染液阳性对照应包括允许鉴定芽孢染色中的错误。 关键生化反应测试包括：1、通过氧化酶反应在非发酵菌（氧化酶阳性）和肠道菌（氧化酶阴性）中分离出革兰氏阴性的棒状杆菌2、通过过氧化氢酶反应区分葡萄球菌（过氧化氢酶阳性）和链球菌（过氧化氢酶阴性）3、通过凝固酶反应区