体外诊断试剂临床研究讲义—培训课件.pptVIP

体外诊断试剂的临床研究 体外诊断试剂的种类 化学或生化检测试剂 免疫学检测试剂 抗原检测 抗体检测 核酸检测试剂 核酸杂交技术 核酸扩增技术 其他试剂 临床研究的意义以及目的 临床前样品虽有代表性，但数量毕竟有限并不能完全代表临床情况 通过临床试验对临床前制定的各项指标进行修正 可以发现或预测在实际应用中遇到的问题，在说明书中提醒用户注意 临床研究的基本要求 伦理考虑 对研究对象保密 临床前研究结果 临床研究的基本要求 伦理考虑 应考虑样本的获得以及对受试者的风险，如样本涉及到羊水、组织切片等，需要提交伦理委员会审查意见及知情同意书。 对临床研究单位以及人员的要求 从事相应的工作 具有相应的技术人员 有相应的仪器设备 如果试剂对仪器无特殊要求，则应选择不同品牌或不同型号 有不同专业人员参加 至少两家省级单位 对实施实验单位的能力进行评价 指综合能力包括检测能力、仪器设备和人员等,主要检测盲样，符合要求这方能参与 对照方法或试剂的要求 新诊断试剂 疾病症状以及临床诊断 相关试剂 研究对象的追踪随访 疾病的判断标准 已有同类产品的试剂 可选择同类试剂; 若评价试剂所用的原料为基因工程产品，应用非基因工程 原料制备的试剂进行评价；对结果不一致样品的处理 临床样品的选择 人群: 根据试剂的适应症选择不同的人群 样品: 应为自然人群，尚未用同类试剂进行筛查过 选择不同地区: 代表被测物的不同流行率，代表被测物的不同基因型或血清型 疾病的时期: 样品的数量: 检测方法 盲法平行检测 结果不一致样品的进一步分析 诊断试剂的临床评价指标 灵敏度 （Sensitivity）：在阳性样品中检出阳性样品的百分比 特异性（Specificity）：在阴性样品中检出阴性样品的百分比 样品分布 (eg. STDEV; ? ) Suitability of cut-off 阴性预期值 (NPV)：若样品没有反应，则不含检测物的可能性 阳性预期值 (PPV)：若样品有反应，则含检测物体的可能性 重复性（Reproducibility） 准确性（Accuracy) 精确性 (Precision） 灵敏度 定义：试剂的检测限度 方法：检测一定数量的阴性样品，计算均值和标准差 均值和标准差，临界值等于均值加上2个标准差 意义：在临界值以上的样品有95%为真阳性 临界值的评估：检测一系列正常人群、非正常人群和特殊人群对临界值进行核对 表示方法：以量值表示（如ng，单位，CFU/ml，PFU/ml，拷贝数等）；以稀释度表示 影响灵敏度的因素 特殊疾病 有一些特殊的病人，其代谢异常可能影响标志物的检测 干扰物质或抑制物质 可以来自与病人（药物）；也可来自于样品的处理过程（反复冻融，溶血等）；或样品本身存在抑制物等 样品基因型和血清型的影响 有些被测物存在多种基因型或血清型，若原材料没有广谱性，则可影响灵敏度 试剂的灰区： 对特殊的试剂要制定灰区，如FDA要求HCV抗体试剂临界值以上均为灰区，对灰区样品要加倍重试 特异性 定义：主要指假阳性的检出情况 评价方法：主要是通过检测部分样品，或特殊样品尤其是性质相近的标志物（如不同基因型或血清型样品），分析出现假阳性的情况；而且分析时要注意在不同量时的特异性 造成非特异性的因素 原料：主要纯度不够，原料本身存在非特异反应 物质 反应模式：如孵育时间缩短非特异反应可提高 3-4倍，非常短时可高达10倍 样品中的干扰物质： 病人本身：如自身免疫性疾病（高免疫球蛋白血症等），黄疸类、溶血类和高脂类病人 病人使用特殊药物 样品处理过程：如不同抗凝剂，不同试管，某些 化学或去污剂以及样品反复冻融等因素 核酸检测中造成非特异性的因素 交叉反应：主要是引物序列与被测物中序列存在一定程度的同源性 样品之间的污染：气溶胶中含有目的微生物，对照的污染等 扩增产物的污染：扩增产物聚集在器皿、台面、设备以及通风设施上等造成污染 污染的处理 酶的灭活（UNG） 主要用于灭活产物 光化学处理 用可溶性psoralen的衍生物处理，在用长紫外照射 即可灭活产物、也可减少样品的污染 化学处理方法 用于表面的处理 10%次氯酸钠 紫外照射 物理的: 专用移液器、一次性试管架、紫外灯、PCR工作罩、滤芯吸嘴。 精确性(Precision) 作用：评价试剂的随机误差 通过重复检测某一或某些特定样品并分析其一致性，通常以变异系数或相对标准误来表示 样品的要求：最好应含有高、中、低三类 每一类样品至少检测4次，实际上检测10次或10次以上 准