梯度密度离心法分离肝癌细胞及其转移性细胞株的建立论文.docVIP

　　梯度密度离心法分离肝癌细胞及其转移性细胞株的建立论文 张萌， 胡少为， 姜桔红， 文剑明 【摘要】 【目的】 建立新的肝细胞癌细胞系，为肝癌实验研究提供更多纯化癌细胞。【方法】 从肝细胞癌患者原发灶和门脉癌栓中获取癌组织，采用Percoll浓度梯度分离癌细胞进行培养，用微环境消化法获取癌细胞克隆并建立细胞系，对培养成功的细胞系进行生长曲线测定、染色体G带核型分析、对比基因组杂交和裸鼠接种成瘤实验。【结果】 对20例肝癌组织进行癌细胞分离培养和克隆.freela (HCC) cell lines and provide more pure liver carcinoma cells for HCC studies.【Methods】The carcinoma tissues the primary lesion and metastatic lesion in portal vein of HCC. The carcinoma cells icro-environmental digestion and cell lines osome karyotype, parative genomic hybridization (CGH) of the established cells planted in nude mice for tumorigenesis.【Results】 20 cases of HCC cells 2 cases of emboli of portal vein. The karyotype shoosomes). A marker chromosome containing 1q and 6p ［t(1;6)］ arker chromosome containing a long homogeneously staining region (hsr) in H4M cells. The main geic alterations analyzed by CGH ber amplification of 1q, 3q, 5p, 6p, 7q and 8q and loss of 4q,.freelplification of 6p, 7p, 11p, 11q13 and loss of 8p, 9, 13q, 16q in H4M cells. Implantation of H2M cells in nude mice for a month produces typical human hepatocellular carcinoma, but no tumor for H4M cells.【Conclusions】 Percoll density gradient centrifuge and micro-environmental digestion is an effective method for cloning of primary carcinoma cell and cell line establishment. Todels for further screening of oncogenes and tumor suppressor genes in HCC. Key a; HCC cell lines; karyotype; parative genomic hybridization 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是常见癌症之一。尽管已有多个肝癌细胞系供实验室研究用，但这些细胞多由国外研究人员建立，而且极少从门脉转移灶建立1。此外，已建立的细胞系缺乏细胞遗传学改变的资料，不能为肝癌癌基因、抑癌基因的筛选及肝癌转移机制研究提供线索。本文描述2例门脉转移性肝癌细胞系的建立过程并检测其分子遗传学改变，旨在为HCC的深入研究提供实验工具。 1 材料和方法 1.1 标本来源 20例肝癌组织取自中山大学附属第一医院肝胆外科手术标本，每份癌组织均取原发灶和门脉癌栓，经病理检查证实和进行细胞培养。 1.2 细胞培养 原发瘤及门脉癌栓组织用含5倍浓双抗（500 u/mL青霉素和500 ?滋g/mL链霉素）PBS冲洗后剪成约1 mm3大小，用0.1%的胶原酶（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO）在 37 ℃下消化30 min，用120目不锈钢网过滤。将细胞悬液铺入装有等渗梯度密度PercollTM（Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, SL塑料离心管的上层，Percoll浓度梯度从底层至最高层依次为70%、50%、40%，每层5 mL。4 ℃下3 500 × g