案例二第一组.pptVIP

问题 作为疾控中心检验人员，应该如何应对此次爆发 列出案例二中与检验人员有关的案例要点： ①患者共同暴露史的婚宴举行于11月9日 ②目前为止的7名患者出现症状时间为11月9-11日 ③检验人员到达现场时间为11月13日 ④该县已经采集了7例患者的粪便标本送往实验室检测以明确诊断。 一.初步分组，制定采样方案 检验科应分为两组： 一组应尽快检验已送检的七份新鲜病人的粪便样本，以确保样品的检验质量和代表性，以防前去现场采样的检验组由于各种客观原因（如：病人已服用抗生素）而未采集到新鲜的代表性样品或途中样品不慎损失污染。 另一组检验人员按照制定好采样方案迅速开始样品采集的工作： 本小组讨论后认为检验人员所需采集样品： ①婚宴承办处的餐饮从业人员的粪便或肛拭标本、手部涂抹标本 ②婚宴承办处厨房内的所有餐具刀具的涂抹标本 ③婚宴承办处的剩余水样、食物、食材或现有水样、食物、食材 ④病人的粪便、肛拭子、呕吐物。 ⑤根据时间线索，第一份血清已可进行采样，第二份血清待发病15-20天时再次采集 注意： 以上①②③④中提到的样品由于时间问题或服用抗生素原因，代表性较小，仅作参考，若检测结果为与患者症状有关的致病菌阳性才具有重要参考性，但若为阴性，不能排除与患者疾病的爆发有关。 ⑤中的两份血清样品的检验结果结合之前送检的新鲜样品的检验结果为确证实验 二.样本采集 水样便或呕吐物取1-3 mL； 成形便取指甲大小； 肛拭子进行肛拭； 水样500mL； 涂抹标本以3-5支无菌棉拭子涂抹后为一件； 食品 ：液体：250 mL；固体：25-50克 三.所采样品的送检 样品采集后应立即送检。 若不能立即送检，应保存于PH8.8-9.0的碱性蛋白胨水中尽快送检。标本与保存液比例约为1：5。 24小时以上才能送检的标本，应使用文一腊二氏保存液保存。 四.检验程序 五.检验步骤 （一）快速辅助诊断：其结果只是初步报告，不是确诊报告。 动力及动力抑制试验： ①如是急性期病人的水样便，则用接种环或滴管取1滴水样便在玻片上然后盖上盖玻片，直接用暗视野显微镜观察动力；或加生理盐水1滴在玻片上，用接种环取较干的粪便1 环放置生理盐水中研匀，盖上盖玻片直接用暗视野显微镜观察动力；高度可疑的标本可取已增菌的碱性蛋白胨水1滴在玻片上然后盖上盖玻片，直接用暗视野显微镜观察动力。如在镜下见到穿梭样运动（象夜空中的流星）即动力试验阳性，否则阴性。 ② 动力试验阳性的标本，则取O1和O139群霍乱弧菌诊断用单克隆抗体各2滴放置玻片上，取标本1滴或1环放在其中研匀，盖上盖玻片，用暗视野显微镜观察是否有原来的穿梭样运动，如穿梭样运动已迅速停止并凝集成块状即动力抑制试验阳性，否则阴性。 ③动力试验和动力抑制试验结果可口头初步报告，但不是确诊报告。双阳时口头报告：高度可疑。 （二）分离培养 1. 粪便、呕吐物和肛拭子：对急性期病人水样便标本在碱性蛋白胨水增菌培养的同时，可用接种环取一满环或用棉拭子直接接种在庆大霉素琼脂培养基上；所有病人标本都应接种碱性蛋白胨水增菌培养。37℃增菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，把接种环在试管壁上轻轻碰一下，待接种环上留有残液后划线接种庆大霉素琼脂培养基，划线时接种环在基线处反复多次划线以接种的菌液干了为准，最后用接种环从基线处开始不间断划线到完成或四区划线（必须保证结果划出单个菌落）。37℃培养，18h-24h。必要时（高度可疑或服药的病人）可取第一次增菌液1 mL转种于8-10mL碱性胨水管中37℃二次增菌培养6～8h后做分离。 2.水样、液体食品样品：取450mL样品，用1mol/L氢氧化钠调整至pH8.8-9.0。 然后加 10倍浓缩碱性胨水50mL。为抑制杂菌可再加入1%亚碲酸钾0.25 mL和1000单位/ mL青霉素1 mL。37℃培养过夜划线接种庆大霉素琼脂培养基，接种划线方法同粪便等样品。 培养时把瓶盖打开三分之一。培养后取菌膜下表层培养物0.2-0.3 mL接转种于10mL碱性胨水管中作二次增菌，37℃培养6～8h，再划线接种庆大霉素琼脂培养基，37℃培养18-24h。接种划线方法同粪便等样品。 3.涂抹标本：使用无菌棉签涂抹3～5只以上水生动物表面、腮部及泄殖腔或食品、餐饮人员、餐具等表面，直接接种到10 mL碱性蛋白胨水，37℃增菌培养8～12h，划线培养。 同时取菌膜下表层培养物接种庆大培养基分离培养，同样的菌膜下培养物再吸0.2～0.1 mL转种于10mL碱性胨水管中作二次增菌，37℃培养8～12h再划线接种庆大霉素琼脂培养基，37℃培养18-24h。接种划线方法同粪便等样品。 4.固体食品样