禽网状内皮组织增殖病病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及其.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 孙明铭 等/禽网状内皮组织增殖病病毒gp90 蛋白单克隆抗体的制备及其识别区分析 75 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn January 25, 2015, 31(1): 75−85 DOI: 10.13345/j.cjb.140225 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 动物及兽医生物技术 gp90 孙明铭，李晓齐，曹红，王永强，郑世军 100193 , , , . gp90 . , 2015, 31(1): 75–85. Sun MM, Li XQ, Cao H, et al. Development of monoclonal antibodies against the gp90 protein of reticuloendotheliosis virus and mapping of their recognition regions. Chin J Biotech, 2015, 31(1): 75–85. 摘 要: 为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒 (REV) gp90 蛋白的单克隆抗体，应用 His-gp90 融合蛋白免疫 BALB/c 小鼠，取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2/0) 进行融合，经过筛选、3 次亚克隆后获得3 株稳定分 泌抗 REV-gp90 蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为 3G5-B8 、3G5-A10 和 1G12。经间接 ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) 方法检测，单克隆抗体的亲和力解离常数 (Kd) 分别为 6.483×10–10 、 4.844×10–10 和9.330×10–10 ，3 株单抗的亚型分别为IgG1 、IgG1 和IgG2b 。经Western blotting 和间接免疫荧光 实验检测，3 株单抗均能识别REV 感染DF-1 细胞后产生的gp90 蛋白。以Western blotting 方法利用单抗检测 不同截短的gp90 蛋白，初步确定3G5-B8 和3G5-A10 2 株单抗抗原识别区均位于 gp90 蛋白第200−245 位氨基 酸，而 1G12 株单抗识别区包含第230−235 位氨基酸。这些单抗为REV 的诊断和致病机理研究奠定了基础。 : 禽网状内皮组织增殖病病毒，gp90 蛋白，单克隆抗体，亲和力，抗原表位 Received: April 14, 2014; Accepted: July 25, 2014 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., Earmarked Fund for Modern Agro-industry Technology Research System (No. NYCYTX-41). Corresponding author: Shijun J. Zheng. Tel/Fax: +86-10 E-mail: sjzheng@ Yongqiang Wang. Tel/Fax: +86-10 E-mail: vetwyq@ (No. (No. NYCYTX-41) 2014-11-24 /kcms/doi/10.13345/j.cjb.140225.html 76 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech January 25, 2015 Vol.31 No.1 De