海洋光合细菌生性培养技术研究.docVIP

海洋光合细菌生产性培养技术研究 摘要本文通过对海洋光合细菌的培养液制备、培养生态条件、接种浓度和培养周期的研究,采用人工海水培养液克服了海洋光合细菌一级培养液沉淀问题,设计的尼龙大拥三级培养工 艺成本低廉易推广应用于群众性生产。 关艘词 海洋光合细菌培养生态 光合细菌是一类能在厌氧光照条件或好氧黑暗条件下利用有机物作供氢体兼碳源进行不 放氧光合作用的细菌,由于其独特的生理生化特性,近年来已推广应用于水产养殖并取得显 著效果。[lj图圈川为了使其能在水产养殖中得到更为广泛的应用而提供大量廉价菌液,我们于 1995一1996年对海洋光合细菌培养技术、生产工艺进行了试验研究,并为养殖生产提供了12t 高质菌液,现将试验情况总结如下: 1材料与方法 1.1 1.1.1 材料 菌种来自青岛海洋大学,经分离、纯化、筛选、重新组合成的复合菌株。 1.1.2基础培养基成份氯化氨0.1%,碳酸氢钠0.1%,醋酸钠0.3%,磷酸二氢钾0.03%, 硫酸镁0.01%,酵母膏0.05%,微量元素母液0.1%。 1.2 1.2。1 试验内容与方法 培养液制备试验 一级培养液容器为500ml盐水瓶,试验培养液分别为1#(基础成份加自然海水)、2“ (基础成份加人工海水)、3#(基础成份配自然海水灭菌后加磷酸盐)三种。经高压灭菌后,观 察培养液沉淀状况,并在无菌条件下等量接种,观察细菌生长状况,以60拜m波长,0.scm比 色皿测定消光值(下同)。 二级培养液容器5000一10000ml玻璃瓶,试验培养液为1”液和2”液二种,经煮沸消 毒,于无菌室内等量接种培养,观察细菌生长状况。 收稿日期:1997一12一101期朱励华等:海洋光合细菌生产性培养技术研究 三级培养液容器为501塑料圆桶,试验培养液为1“液和2“液二种,用次氯酸钠消毒, 硫代硫酸钠还原,按三级培养方法,二组等量接种培养,观察细菌生长情况。 L2.2培养生态条件试验 在一级培养中,用不同温度、光源、光照强度和pH值等生态因子进行光合细‘菌生长影 响试验;用自制控温培养箱调节温度,用不同功率的灯泡调节光照强度,用碳酸氢钠或氢氧 化钠调节pH值。每天定时测定菌液消光值、pH值,注意附壁、沉淀等现象,记录细菌生长 情况。 充气试验,容器为1000oml的玻璃瓶,采用二级培养方法接种后,分为四组:A组24h连 续光照不充气;其余三组均为自然光照下进行。B组不充气,C组充气,D组半充气(仅晚间 黑暗充气)。观察菌液色泽、气味、瓶底沉淀物等现象,并记录细菌生长状况。 L2.3接种浓度和培养周期试验 sooml盐水瓶作容器,分别按不同比例l比5(E)、l比4(F)、l比3(G)、l比2 (H)、1比1(D进行接种,采用一级培养方法,每天定时测定菌液消光值和pH值,记录细 菌生长情况。并对结果进行处理,比较K值大小。 K=(Dn一D。)/T 式中:K—:生长效率D。—:n天后的消光值D。—:初始消光值 1.2‘4 T—:培养时间(d)三级培养试验 用501塑料圆桶作容器,分室内控温25一28‘C、光照1000一2000烛光(J)和室外大棚 自然条件培养(K)二组,每天定时测定菌液消光值和pH值,观察细菌生长状况。 2结果 2.1培养液制备试验 表1培养液的不同制备方法对海洋光合细菌的影响 Table1Theeffertofthedifferentmanufaeturemethodof eultivationliquidonmarinePhotosynthetiebaeteria 消毒灭菌法培养液培养液的沉淀状况起始消光值培养sd后消光值 ++0.4770.845 一级培养 2# 高压灭菌 3# 二级培养 煮沸消毒 三级培养 次抓酸钠消毒 0.385 0.385 十 1.200 1.205 0。470 0.385 0.384 0.384 0.962 1201 1.190 1.195 ####‘.上夕曰.二勺白浙江水产学院学报17卷 经5d培养结果见表1,从表1可见,三组培养液均能不同程度地促使细菌生长,在一、二 级培养中,1“液产生沉淀,细菌消光值增长为0.368和0.482,其增长值与沉淀程度成反比。 2“液和3“液无沉淀现象,细菌消光值增长为0.806和0.811。 2.2培养生态条件试验 2.2,1温度试验从表2可见,光合细菌在10一42‘C的温度下活动正常;在25一28℃的温 度下生长最适,并能保持较长时间的活力;30‘C以上亦能生长,但易老化下沉;5℃以下细菌 下沉,活力差,复活困难。 2.22光照试验从表2可见,在500一2000烛光范围内,光照度越强,效果越好,室内采 用25一60瓦白炽灯作光源可满足生长,注意培养物需离灯泡30cm以上,否则易产生附壁现 象。 表2温度、光照对海洋光合细菌生长繁