促肝细胞生长素对百草枯中毒引起大鼠急性肺损伤影响.doc

促肝细胞生长素对百草枯中毒引起大鼠急性肺损伤影响 　　[摘要] 目的 研究促肝?胞生长素（pHGF）对急性百草枯中毒大鼠肺组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的影响。 方法 将90只SD大鼠按照随机数字表法随机分为三组：非药物处理组，毒素处理组，治疗组，各组30只。毒素处理组、治疗组均以PQ（25 mg/kg）一次性腹腔注射染毒，治疗组予每天1次pHGF（50 μg/kg）腹腔注射，持续至第7天。各组于注射后第1、3、7天时间点处死相同数目大鼠，观察各组病理学变化，并收集血清及肺组织用于相关指标的检测分析。 结果 与非药物处理组比较，毒素处理组各时间点动脉氧分压（PaO2）均有不同程度下降，治疗组第1、3天相比毒素处理组PaO2有所改善（P 0.05）；毒素处理组较非药物处理组肺组织Bax、Bcl-2蛋白表达及血清TNF-α水平明显增高（P 0. 05）. Compared with non drug treated group， the protein expression of Bcl-2 and Bax in lung tissue and serum TNF-α level in venoms group were significantly increased （P 　　百草枯（PQ）是一种常见的剧毒性触杀型除草剂，在体内可以导致多个器官的损伤。肺是PQ中毒的主要靶器官[1]，常表现为早期的急性肺损伤及后期的肺纤维化[2]。PQ中毒机制复杂，细胞氧化损伤、炎症/细胞因子失调及细胞凋亡均证明参与了PQ中毒过程[3-4]。促肝细胞生长素（pHGF）是一种多功能细胞因子，在细胞增殖、血管生成及抗细胞调亡、修复损伤组织等方面发挥着重要的生物学功能[5]。研究证明，pHGF通过阻止肺泡细胞的调亡、促进肺泡细胞的再生及肺血管的生成提高大鼠的运动耐量、气体交换[6]。本研究通过PQ染毒大鼠建立肺损伤模型，探讨pHGF对PQ中毒大鼠急性肺损伤的保护作用及可能机制 1 材料与方法 1.1 试剂与药物 20%PQ水溶液，由先正达南通作物保护公司提供；pHGF注射液（规格：2 mL∶30 μg，批号：1505029），购自威海赛洛金药业有限公司；Bax免疫组化试剂盒（批号：160708254ZC2）、Bcl-2免疫组化试剂盒（批号：160509660A）、免疫组化抗体稀释液（批号：160615452f）、二抗试剂（批号：2017049）及DAB显色剂试剂盒（批号：160509660A），购自上海迈新生物技术有限公司；肿瘤坏死因子α（TNF-α）试剂盒（批号：8260243）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号，购自南京建成生物工程研究所 1.2 动物 90只SPF级健康成年SD大鼠，雌雄各半，日龄50～60 d，体重（200±20）g，购于桂林医学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK桂2013-0001，批号：45000800000021，饲养条件：昼夜规律，温度18～25℃，相对湿度50%～70% 1.3 动物模型的建立及分组 将90只SD大鼠按照随机数字表法分为三?M：非药物处理组，毒素处理组，治疗组，各组30只。各组以第1、3、7天为观察点。毒素处理组、治疗组均以PQ（25 mg/kg）一次性腹腔注射染毒后，予治疗组每天1次pHGF（50 μg/kg）腹腔注射，持续至第7天，非药物处理组、毒素处理组注射等量生理盐水作为对照 1.4 取材及样品制备 各组于第1、3、7天时间点取相同数目大鼠，以3 mL/kg的10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，以胸腹正中线为切口，暴露心脏于心尖搏动处进针采血，并分离肺脏取肺组织固定于10%中性福尔马林溶液48 h后，常规石蜡包埋，备于HE染色及免疫组化检测 1.5 动脉血氧分压（PaO2）检测及方法 采取0.3 mL动脉血置于抗凝管内，半小时内送往桂林市第二人民医院检验科，血气分析仪检测PaO2 1.6 SOD、TNF-α测定及方法 将血浆于低温下经离心半径10 cm、3000 r/min离心20 min后，取上层清液血清，按照SOD、TNF-α试剂盒的步骤要求操作，分别应用水溶性四氮唑（WST-1）法、酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测SOD活力、TNF-α水平 1.7 病理学检查及方法 常规脱水、石蜡包埋，制作切片，苏木精-伊红（HE）染色，光学显微镜下观察各组大鼠肺组织病理组织学改变 1.8 肺组织Bcl-2、Bax表达检测及方法 将肺组织切片按照说明书操作，应用免疫组织化学（二步法）检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果判断：细胞浆或细胞