液相色谱的使用.doc

岛津LC-10A液相色谱使用规程（紫外检测器） HPLC样品必须经过0.45μm微孔滤膜过滤（最好用进口的，油膜可过滤水溶剂和有机溶剂，水膜只能过滤水溶剂）。 左边一列的仪器从上到下分别是：荧光检测器，A泵，B泵，脱气装置。 中间一列的仪器从上到下分别是：示差检测器，主控器，自动进样器。 右边一列的仪器从上到下分别是：紫外检测器，柱温箱。 估算本次测定所需的流动相体积，检查一下与A泵连接的瓶中的有机相和与B泵连接的瓶中的水相是否能够完成本次测定，体积不够补足之。 A泵永远连接有机相（甲醇和乙腈），B泵永远连接水相（去离子水，超纯水？，盐溶液）。 如果所用的流动相为有机相与盐溶液的混合，建议取一小烧杯，按有机相和盐溶液的比例混合，看是否产生混浊或者沉淀，如果有此现象建议重新查找新的流动相，以免堵塞仪器管路。 按自动进样器门上的“push”，打开自动进样器的门，拉出自动进样器的样品盘，将待测样品瓶放在样品盘中，样品盘的0号放第1个样品，1号放第2个样品，以此类推。样品瓶的装液量建议1-1.5mL？。如果样品中有挥发的物质，样品瓶要加上带胶垫或者铝箔的瓶盖。 打开A泵，B泵，脱气装置，自动进样器，紫外检测器，柱温箱的开关，顺序无严格要求，但要最后打开主控器开关。 拧松A泵和B泵的阀（DRAIN），阀上标明了拧松（OPEN）和拧紧(CLOSE)的方向，轻轻拧一下，拧松即可。 分别按下A泵和B泵上的purge键，此时A泵和B泵的显示屏显示PURGING LINE，说明此时正在冲洗A泵和B泵，待冲洗结束，A泵和B泵的显示屏重新显示流速和压力，此时拧紧A泵和B泵的阀（DRAIN），即向CLOSE方向旋转阀，不用太用力，拧紧即可。 冲洗A泵和B泵的时候，两泵从瓶子中抽出的液体应不夹杂着气泡。如果夹杂着气泡，则此次冲洗完毕后，再purge一次。如果还有气泡，将插入瓶中的滤头拔下，垂直放入小烧杯正中央，加入去离子水没过滤头，超声清洗30s，重新装在管路上，再重新按泵上的purge键观察，一般会恢复正常。 打开柱温箱的门，检查里边是否有色谱柱，所安装的色谱柱是否为我们想用的（一般应为C18柱），柱子是否安装正确，柱温箱内上部有三个管路，左边两个分别连接示差检测器（上有标签RID）和荧光检测器，右侧连接紫外检测器（柱子应该连在这根管路上）。 打开电脑，双击CLASS-VP→双击Instrument 1，此时如果电脑与仪器成功连接上了，应该听到一声长鸣。 Control→LC Setup Assistant 调出LC设备控制界面（有时候双击Instrument 1就有该界面，不用调取），界面上有图形化的泵，自动进样器样品盘，色谱柱，紫外检测器。 File→Method→New，点击LC设备控制界面中泵的图形。点击Pumps，A.Flow处输入A泵流速，B.Flow处输入B泵流速，P.Max处输入最大压力（超过该压力，仪器自动停泵，保护仪器和柱子，一般设定为？）。点击CTO-10Avp，Oven temp处输入柱温。点击SPD-10Avp，Wavelength Ch1处输入检测波长，Acquisition Channel On前打勾，Run Time处输入运行时间。如果需要梯度洗脱，点击Time Program进行设定。关掉该界面，注意不要关掉Instrument1的界面，点击屏幕右上角的×，这里有两个×，上边的×是Instrument1的，别点错了。 File→Method→Save，File name处输入Method名称，一般格式为：“年月日+自己名字”，例如zm。Save in处点击下拉菜单选择Local Disk(C:)\CLASS-VP\Methods\年的文件夹，例如：Local Disk(C:)\CLASS-VP\ Methods\2011。点击LC设备控制界面中的Download，载入该方法。 File→Sequence→New，Data path处输入：C:\CLASS-VP\Data\data年\年-月\年月日+自己姓名。例如：C:\CLASS-VP\Data\data2011\11-08zm。Data file处输入：年月日a(00)。例如：110825a(00)。Start vial处输入第一个样品在自动进样器样品盘中的位置编号，一般为0。End vial处输入最后一个样品在自动进样器样品盘中的位置编号+1。Injection volume处输入：进样量，单位μL。Repetitions create multiple records签名打勾。全设定完，点击对话框右上部的OK。电脑会用英语询问该文件夹不存在，是否创建之，点Yes。 点击Yes后，会出现Sequence界面，将第一行Reps