CRISPRCas9敲除文库实现高通量功能性基因筛选.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2014, 36(7): 853–856 DOI: 10.11844/cjcb.2014.07.9001 领域前沿·中国 魏文胜, 北京大学生命科学学院研究员。1999年7月毕业于密西根州立大学, 获得遗传学博士学位; 之后在美国斯坦福大学医学院从事博士后研究, 2005 “ ” 年转为Research Associate 。2007年7月获北京大学 百人计划 引进国外杰出 人才项目资助, 回国建立实验室。长期从事病原微生物和宿主细胞的相互 报 作用研究, 多篇第一或者通讯作者论文发表在包括Cell 、Nature 、PNAS等学 术杂志。近期, 在真核基因编辑技术的研发方面取得重要进展, 首次完成了 TALE蛋白碱基识别RVD 的全部解码(Yang et al, Cell Res 2014), 并开发出基 于CRISPR/Cas9 系统的人源细胞敲除文库, 用于基因的高通量功能性筛选研 学 究(Zhou et al, Nature 2014)。 学 通过哺乳细胞CRISPR/Cas9敲除文库实现 高通量功能性基因筛选 物* 蔡昌祖 周悦欣 朱诗优 魏文胜 (北京大学生命科学学院, 北京 100871) 探索基因及其表达蛋白在各种生理和病理过程 模功能性筛选的方法依然空缺。RNA干扰(RNA 生 中的作用是生命科学领域研究的永恒主题。对原核 interference, RNAi)文库曾被广泛应用于功能缺失型 或者模式生物来说, 有相对简单和成熟的遗传技术手 基因筛选。这种文库主要分为siRNA和shRNA两类, 段; 但是对高等生物特别是哺乳类细胞或者个体, 一 二者的原理都是通过RNA干扰降低目的基因的表达 直缺乏有效方法实现对特定基因的精准修饰来进行 来引起表型改变。不同之处在于, siRNA为人工合 胞 功能研究。随着近几年基因组靶向编辑技术的出现, 成的短RNA片段, 只能在96孔或384孔等培养板中进 对单一真核基因进行定点改变的遗传手段得以迅速 [11] 行彼此独立的表型筛选 ; shRNA需要通过表达载 发展。这一炙手可热的新型遗传工具包括锌指核酸 体实现作用, 因此可以构建到慢病毒等载体上通过 内切酶(zinc finger endonuclease, ZFN)[1-4] 、类转录激活 病毒侵染方式进行混合型文库筛选, 再通过微阵列 细 因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector 芯片(microarray)[12-13]或者深度测序(deep sequencing) nucleases, TALENs)[5-7] 以及成簇规律