生物化学基因表达与调控(第十二章).ppt

第十二章基因表达与调控 DNA复制的定义、特点（方式、方向、酶）、过程（起始、延长、终止）； 逆转录酶及逆转录现象。 RNA转录的定义、特点（方式、方向、酶、蛋白因子）、过程（起始、延长、终止）；RNA转录后修饰。 翻译的定义、特点（合成体系、几种RNA的作用、方向、酶、蛋白因子）、过程（起始、延长、终止）；新生蛋白质的转运及加工。 基因表达的调节控制。 教材第34、36、37、38、39章 将逆转录病毒RNA转换成DNA的最关键酶是逆转录酶（reverse transcriptase）。该酶具有Rnase H活性（降解RNA活性）和DNA聚合酶活性（RDDP、DDDP）。 逆转录酶没有3’-5’外切酶活性或校正活性，它的错误率比任何DNA聚合酶都高，例如人免疫缺陷病毒I（human immune deficiency virus I, HIV I）逆转录酶每合成2000到4000核苷酸就会掺入一个不正确的碱基，说明HIV I的高突变率。 PCR技术的应用 用于合成特异探针 用于DNA测序 产生和分析基因突变 重组DNA 扩增未知的DNA 比较基因组序列 应用于临床医学与法医学 1、引起突变的因素： （1）自发因素： 自发脱碱基：由于N-糖苷键的自发断裂，引起嘌呤或嘧啶碱基的脱落。每日可达近万个核苷酸残基。 自发脱氨基：胞嘧啶自发脱氨基可生成尿嘧啶，腺嘌呤自发脱氨基可生成次黄嘌呤。每日可达几十到几百个核苷酸残基。 复制错配：由于复制时碱基配对错误引起的损伤，发生频率较低。 由紫外线、电离辐射、X射线等引起的DNA损伤。其中，X射线和电离辐射常常引起DNA链的断裂，而紫外线常常引起嘧啶二聚体的形成，如TT，TC，CC等二聚体。这些嘧啶二聚体由于形成了共价键连接的环丁烷结构，因而会引起复制障碍。 脱氨剂：如亚硝酸与亚硝酸盐使C脱氨基生成U，A脱氨基生成I。 烷基化剂：如氮芥、乙基乙烷磺酸等是一类带有活性烷基的化合物，可提供甲基或其他烷基，引起碱基或磷酸基的烷基化，甚至可引起邻近碱基的交联。 DNA加合剂：如苯并芘，在体内代谢后生成四羟苯并芘，与嘌呤共价结合引起损伤。 碱基类似物：如5-FU，6-MP等，可掺入到DNA分子中引起损伤或突变。 断链剂：如过氧化物，含巯基化合物等，可引起DNA链的断裂。 2、DNA突变的类型： 分为直接修复和取代修复两大类。 （1）光复活： 修复任何嘧啶二聚体的损伤，修复过程为：光复活酶识别嘧啶二聚体并与之结合形成复合物→在300～600nm可见光照射下，酶获得能量，将嘧啶二聚体的丁酰环打开，使之完全修复→光复活酶从DNA上解离。 （2）转甲基作用： 在转甲基酶的催化下，将DNA上的被修饰的甲基去除，转甲基酶自身被甲基化而失活。 （3）直接连接： DNA断裂形成的缺口，可以在DNA连接酶的催化下，直接进行连接而封闭缺口。 （1）切除修复： 适用于多种DNA损伤的修复。该修复机制可以分别由两种不同的酶来发动，一种是核酸内切酶，另一种是DNA糖苷酶。 （2）重组修复： 是DNA的复制过程中所采用的一种有差错的修复方式。 （3）SOS修复： 一种在DNA分子受到较大范围损伤并且使复制受到抑制时出现的修复机制。 ?损伤诱导一种特异性较低的新的DNA聚合酶，以及重组酶等的产生。 ?由这些特异性较低的酶继续催化损伤部位DNA的复制，复制完成后，保留许多错误的碱基，从而造成突变。 在RNA聚合酶催化下，以一段DNA链为模板合成RNA并将DNA所携带的遗传信息传递给RNA的过程称为转录。 经转录生成的RNA包括rRNA，tRNA，mRNA，snRNA等。 转录的不对称性是指以双链DNA中的一条链作为模板进行转录，从而将遗传信息由DNA传递给RNA。 对于不同的基因，转录信息可以存在于两条不同的DNA链上。能够转录RNA的那条DNA链称为模板链 (非信息链，反意义链），而与之互补的另一条DNA链称为编码链（信息链、有意义链）。 位于基因上游，与RNA聚合酶识别、结合并形成转录起始复合物的相关DNA顺序称为启动子（promoter)，本身不被转录。通常还包括促进这一过程的调节物的结合点。（约70～80bp,p460图36－6） 原核生物中的RNA聚合酶全酶（分子量约为465000）由六个亚基构成，即α2ββ’ωσ，含两个Zn2+。 σ亚基与转录起始点的识别（分子量大约是32000～92000，p460表36－3）有关，而在转录合成开始后被释放，余下的部分（α2ββ’ ）被称为核心酶（分子量大约是350000 ），与RNA链的聚合有关。 （p456表36－1） α-鹅膏蕈碱是真核细胞RNA聚合酶的抑制剂。按其对α-鹅膏蕈碱敏感性分为三种，均由10～12个大小不同的亚基所组成，