原创：1.1.1 基因工程的工具.pptVIP

插入基因 终止子 标记基因 复制原点 启动子 RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录出mRNA。 鉴别受体细胞是否含有目的基因。 转录停止的位置。 DNA重组技术 的三件工具： 限制性核酸内切酶、 DNA连接酶、 运载体。 总结 质粒 目的基因 限制性内切酶 连接酶 重组质粒 例题： D 当堂检测 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使（ ） A.同种限制酶 B. 两种限制酶 C.同种连接酶 D. 两种连接酶 A 2.正确顺序是(　　) A．①②③④? ?B．①②④③? ? C．①④②③ ??D．①④③② C 3.下列关于DNA分子片段示意图的 说法中，正确的是（ ） A 4.（多选）下列有关DNA连接酶的说法中， 正确的是（ ) A.其化学本质是蛋白质 B.能使黏性末端或平末端碱基之间形成氢键 C.通过DNA连接酶可以将单个脱氧核 苷酸连接在已存在的DNA片段上 D.催化磷酸二酯键形成连接两段DNA AD 5.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个 抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用（ ） A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B.有利于对目的基因是否导入进行检测 C.增加质粒分子的分子量 D.便于与外源基因连接 B 6. —G GATC C — —C CTAG G — 酶Ⅰ —G —CCTAG GATCC — G — + — GATC ---- GATC — — CTAG ---- CTAG — 酶Ⅱ — —CTAG GATC --- ---CTAG + GATC — — + 能。因为形成的黏性末端相同。 本节内容小结： 1.知识梳理： 基因工程的工具： ①限制酶（分子手术刀）：识别特定的核苷酸序列并切割特定两核苷酸之间的磷酸二酯键； ②DNA连接酶（分子针线）：连接两核苷酸之间的磷酸二酯键； ③基因进入受体细胞的载体（分子运输车）：最常用的是细菌质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 2.方法、技巧、规律总结： 限制酶切割的是磷酸二酯键，而DNA连接酶连接的正是两个断开此键的DNA片段。“分子运输车”是目的基因进入受体细胞的载体，它具有的若干特点是基因工程鉴定、选择、表达的关键，可以说，没有它，目的基因即使进入受体细胞，也难以稳定保存，更谈不上复制和表达。 3.思维误区提示： DNA连接酶与DNA聚合酶根本不是同类酶，其功能特点大不相同，注意其区别。 第1课时 基因工程：又称__________技术。是指在________通过人工“剪切”“_________ ”等方法，对生物的基因进行改造和_______组合，然后导入__________，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 DNA重组 体外 拼接 重新 受体细胞 课堂学习 一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 ⒈主要来源： ⒉命名： ⒊作用： 4.识别序列 特征: 5.作用结果： 识别特定脱氧核苷酸序列 原核生物 产生黏性末端或平口末端 ,切断磷酸二酯键。 （具有特异性/专一性）：一种限制酶只能识别DNA上特定的脱氧核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数识别序列由4、5或8个核苷酸组成 回文序列 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性核酸内切酶 命名： EcoRⅠ 大肠杆菌（Escherichia coli R） 练习：流感嗜血杆菌的d菌株( Haemophilus influenzae d )中先后分离到3种限制酶，则分别命名为: HindⅠ、Hind Ⅱ和Hind Ⅲ 磷酸 二酯键 识别DNA特定的序列,使DNA分子链的特定部位切开。 . Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平切 错位切 SmaⅠ 平口末端　　　平口末端 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平口)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平口)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平口)末端