第2章 鸡神经病靶酯教案.pptVIP

成年鸡神经病靶酯酶的同一性和特征描述 制作者 :吕飞燕 2009.05.25 Contents 文章出处及作者简介 文章出处：GENE 2009.01 作者及其简介：常平安，伍一军等 伍一军，男，安徽桐城人。佐治亚医学院分子医学与遗传学系基因调控专业博士后，现任中国科学院动物学研究所研究员，中科院研究生院教授，博士研究生导师。主持分子毒理学实验室，专业方向为分子毒理学，主要研究领域为神经毒理学、环境毒理学以及药物引起的神经疾病。主要研究兴趣在于环境有害化学物质的神经毒性机制；神经病靶标酯酶引发迟发性神经毒性的分子机理； 文章的主要内容总结 这篇文章主要讲NTE的基因排序。 NTE的基因中的活性部位。 NTE的基因中不同部位被GFP标记后主要在哺乳动物中的分布。 GFP标记的cNTER可以被macroautophagy和蛋白酶体这两种东西破坏，而导致其含量下降。 NTE的概念及其基本特点 　 神经病变靶标酯酶(neuropathy target esterase ,NTE)是在研究有机磷化合物引起的迟发性神经病变(organophosphate2induced delayed neuropathy ,OPIDN) 的发生机制过程中发现的。通常认为NTE 的抑制和“老化”是OPIDN 发生的前提[。NTE 是一个由1 327个氨基酸组成的跨膜蛋白。将不同的NTE 肽段在大肠杆菌中重组表达,发现具有有机磷敏感性和戊酸苯酯水解活性的重组多肽至少含有727-1216 氨基酸序列,这一重组多肽被称为NTE 酯酶活力域(NTE esterasedomain ,NEST) 。以往的研究结果提示,NTE 除了具有酯酶活力外,NEST在神经细胞分化和神经系统发育中起着重要作用 。 NTE不仅存在于脑、脊髓和周围神经，在外周淋巴细胞内含量也很高。 所选用的材料与方法 实验结果 鸡的完整的NTE序列是4501bp组成 （base pair kilo-base pair DNA碱基对数目 生物学上描述DNA常用的kb、nt、bp kb=千碱基对 kilobase nt＝核苷酸 nucleotide bp＝碱基对 base pair ） 鸡的NTE有两个不同的区域，其中一个是推定的调节区（cNTER）,另外一个是催化区，也叫NTE酶的活性区域 序列分析表明，鸡的NTE的排列与人和鼠的NTE排列有高度的相似性，其中与人有80%的相似性，与鼠有79%的相似性。 实验结果二，cNEST是有NTE活性的，而不是cNTER 是用细胞转染的方法来证明的。 就是用GFP来标记cNEST和cNTER的羧基端，48h的转染后，用Western blot法来测定下她们的分子量，结果表明他们的分子量分别为65和83kDa NTE活性测定是在HEK293T cells中看GFP的表达。 Distribution of GFP tagged cNTER and cNEST protein inmammalian cells 因为cNTER and cNEST都用GFP来标记，所以cNTER and cNEST的分布可以用荧光显微镜直接分析出来 荧光显微镜结果 NTER和NEST分子量的测定 不同处理因素对cNTER的影响 Discussion 相对于哺乳动物的PNPLAs，鸡的PNPLAs 尚未引起足够的重视。尽管成年母鸡常被用作OPIDN的动物模型。但是关于NTE的排序和分子特征知道的很少。 在目前的研究中，鸡的NTE被完整的分离出来，并且在氨基酸水平与人和小鼠有高度的相似性。 另外，蛋白质结构和区域与人也有高度的相似性。 An ER like localization of pcNTER-GFP was observed and cNTE was reasonably considered to be an ER-anchored protein. cNTE may be degraded by macroautophagy. . Chicken NTE was an ER-anchored protein An ERlike localization of pcNTER-GFP was observed and cNTE was reasonably considered to be an ER-anchored protein. Therefore, cNTE may be degraded by macroautophagy. that cNTE was degraded by the proteasome and the similar D-box sequences ma