内蒙古凉城县春秋时期古代马线粒体DNA分析.PDFVIP

内蒙古凉城县春秋时期古代马线粒体DNA 分析 1 2 1 3 1,3 1 蔡大伟 ，曹建恩 ，陈全家 ，韩璐 ，周 慧 ，朱 泓 （1 吉林大学边疆考古研究中心考古DNA 实验室，长春，130023；2 内蒙古自治区文物考古研究所 ，呼和浩特，010010； 3 吉林大学生命科学学院，长春，130023） 摘要：为了揭示中国现代家马的起源，我们分析了来自内蒙古凉城县小双古城和板城遗址春秋时期11 个古代马线粒 体DNA。我们成功地获得了全部11个样品的古DNA 序列，为了进一步分析中国古代马与现代家马的母系遗传关系， 我们从“基因银行”里选取了东亚、中亚、近东、欧洲等地的代表性家马品种作为比对序列构建了系统发育网络。 系统发育网络图显示11个中国古代马分布在5个现代家马线粒体DNA世系中，暗示中国古代马具有广泛的母系来源， 并且对现代家马基因池的形成具有重要贡献。中国家马的起源比以前想象的要复杂，可能既有本土起源的因素，也 受到外来家马线粒体DNA 基因流的影响。 关键词：线粒体DNA；家马；系统发育网络；世系 中图分类号：K871 文献标识码：A 1.前言 2003 年5 月至10 月间，内蒙古文物考古研究所对位于凉城县境内岱海南岸的小双古城墓地和 北岸的板城墓地进行了抢救性考古发掘。 小双古城墓地面积很小，占地仅3000 平方米，清理墓葬16 座。墓穴底部放置殉牲的马、牛、 羊头骨及蹄骨，头骨均正置，吻部朝前，蹄骨散放于头骨之间。其中羊头骨最多，马、牛头骨较少。 [1] 根据墓葬的性质，陪葬的器物，推测此墓地的年代为战国早期 。 板城墓地占地面积15000平方米，共清理墓葬67 座。除被破坏的墓葬外，墓穴前部填土中均见 殉牲，种类有马、牛、羊、狗的头骨和蹄骨。动物头骨多下颌朝上摆放，头向与人骨一致，马、牛 等大型动物的头骨置于前部，羊、狗的头骨放在后边，蹄骨散落于其间，推测该墓地年代属春秋晚 [1] 期 。 受内蒙古文物考古所曹建恩先生委托，吉林大学边疆考古研究中心考古 DNA 实验室对两处遗 址出土的马骨进行了线粒体DNA （mtDNA ）分析，现将结果报告如下。 2.材料和方法 2.1 样品的采集和处理 样品是由内蒙古文物考古所曹建恩先生提供，一共是11 个牙齿标本，其中7 个来自板城墓地（实 验编号LB1—6 ），4 个来自小双古城墓地 （实验编号LS1—4 ）。首先用毛刷清理样品表面的灰尘和 泥土，紫外线照射30 min，用钻头（Strong 90 ）打磨骨样表面，进一步除去骨表面的杂质以及外源 DNA （重复3 遍打磨掉2 －3 mm 厚），液氮中保存过夜，第二天，将样品放入球磨机的磨碗中打磨 成骨粉，分装成2 g/管，－20 ℃冷冻保存。 2.2 古DNA 抽取、扩增和测序 [2] 每个样品取2 g 骨粉，按照杨东亚等人的方法进行古DNA 抽提 。利用一对套叠引物扩增300 bp [3] 的mtDNA 控制区片段 （位点 15473-15772） 。PCR 扩增产物通过2%琼脂糖(Biowest, German)凝胶 电泳检测，用QIAEX® ⅡGEL Extraction Kit 胶回收试剂盒(QIAGen，Germany) 纯化PCR 产物。使 用ABI PRISM® 310 Genetic Analyzer 全自动遗传分析仪（Applied Biosystems ，USA ）通过Dyeprimer 试剂盒进行测序反应。 2.3 数据分析 古马DNA 序列被截取到位点 15494—15755 (262 bp) ，利用Clustal X 1.83 软件进行序列对位比 对，确定变异位点及单倍型．利用NetWork 软件构建系统发育网络。 3 ．结果 3.1 古马mtDNA 序列变异 利用两对套叠引物从11 个样品中成功的扩增出300 bp 的线粒体控制区序列。所有的抽提和扩 增的空白对照均为阴性，表明在骨样的抽提和扩