相干拉曼散射显微术.PDF

中国科学: 化学 2011 年 第41 卷 第1 期: 1 ~ 16 SCIENTIA SINICA Chimica www. scichina. com chem. scichina. com SCIENCE CHINA PRESS 评 述 相干拉曼散射显微术 ①② ①② ①② ①③ ①②* 陈涛 , 虞之龙 , 张先念 , 谢晓亮 , 黄岩谊 ① 北京大学生物动态光学成像中心, 北京 100871 ② 北京大学工学院, 北京 100871 ③ Department of Chemistry and Chemical Biology, Harvard University, Cambridge, MA 02138, USA *通讯作者, E-mail: yanyi@pku. edu. cn 收稿日期: 2011-09-19; 接受日期: 2011-10-06 doi: 10. 1360/032011-609 摘要 相干拉曼散射显微术(Coherent Raman Scattering Microscopy)是一类植根于拉 关键词 曼散射的光学显微成像方法, 主要包含相干反斯托克斯拉曼散射(Coherent Anti-Stokes 光学显微术 相干拉曼散射 Raman Scattering, CARS)和受激拉曼散射(Stimulated Raman Scattering, SRS)两种方法. 反斯托克斯拉曼散射 CARS/SRS 显微术通过探测目标分子特定的振动来提供成像所需的衬度, 通过非线性 受激拉曼散射 光学过程大大提高了检测的灵敏度, 同时本征地具备三维成像能力. CARS 和 SRS 显 无标记成像 微术可以对脂类等不易被标记的物质成像, 还可以很好地通过选择振动光谱, 对生物 体内特定小分子物质如药物等, 以及生物大分子如核酸、蛋白质等进行无需标记的成 像, 因此成为极有潜力的活体(in vivo)成像手段. 本文主要介绍了CARS 和SRS 显微术 的基本原理、实验操作及其在化学和生命科学中的应用. 1 引言 然而透射光在观察透明样品时则遇到了困难, 因为难以仅仅通过光的吸收在这些样品中获得良好 光学显微镜通过光学系统放大微小物体的影像, 的图像衬度. Frits Zernike 于 1930 年代发明的相差显 使之能够被肉眼观察. 它的发明为人们观察微米及 微术, 漂亮地解决了这类样本的观察难题, 极大地促 亚微米尺度的事物提供了有力的工具, 使得人类对 进了生命科学的发展, 他本人也因此获得 1953 年的 微观世界的认识有了巨大的提升 . Anton van 诺贝尔物理学奖. 这一技术的基本考虑在于透明样 Leeuwenhoek 被认为是显微学之父, 早在 1674 年, 他 本的折射率分布会改变透射光波前的相位分布. 这 就用自制的显微镜观察到了微生物; 英国科学家 样, 当通过样品的透射光与另一束参考光干涉时, 相 Robert Hooke 也常被认为是显微学的鼻祖, 他观察到 位的差异可以转化为振幅的变化, 得到的图像就能 了死亡植物细胞留下的细胞壁. 最常见的显微观察 反映透明样本