流式细胞检测仪在医学检验中用,钟反.pdf

一 碱 仪 铂 1993年第 3期 流式细胞检测仪在医学检验中的 用 ，反钟 上海第二医科大学瑞金医院检验系 鱼豆 王鸿利 流式细胞捡测仪 (FlowCytometry，FCM 488nm 的蓝色激光为激发源 ，激光的功率稳定 或 Fluore—scence Activated Cell Sorter， 度在 1 以下，单谱线功率 0。5W 以下，激光管 FACS)是一种快速 的单细胞定量分析仪器 ，从 工作时，2 电能转为光能，98 转为热能。 FCM 的工作原理上看 ．单细胞流 、单细胞照明 (2)气控单细胞层漉系统 和单细胞测量是这项技术的关键 ，快速 的单细 由压力氮气瓶、压力计、鞘流瓶流至喷嘴、 胞生化成分的定量测定和细胞大群体水平上的 吸废瓶、样品室等多个可调气体阀组成，通过 测定工作是FCM 的独特之处。FCM 测量在溶 调节氮气压力使鞘液压力和细胞悬液流量 比来 液中的单个细胞或粒子的化学和物理特性 ，该 控制检测细胞的流速，一般每秒液流速度达 仪 器 的分 析 系 统 可 以每 秒 种 检 测 5000至 8m，通过的细胞约在 1万个左右，当细胞层垂 10000个细胞 ，它的计算机 系统可以根据细胞 直而下与激光束交会时，便产生了散射光和荧 的大小、内部构造、表面标记进行多参数数据 光 。 处理 ，所得 的结果客观性强 ，并具有很高的统 (3)光 电检测和计算机信息处理系统 计拦精度 ，这些长处是 以往各种传统分析技术 电滤光系 (让特定的波长光通过)、中子吸 难 以达到的，这给临床诊治提供 了细胞和分子 收板 (吸收散光)、光 电倍增管 [分别感受散射 水平的实验资料…。 光 (FLS)、90。散 射 光 (90LS)、绿 荧 光 目前实验室主要使用的FCM 有三类 ：一 (GFL)、红荧光 (RFL)]、示波器、图像显示屏 类是 Ortho公司的 Spectrum ■和 Cytofluro— (将数字转 化为图像)、电子计算机 (计算、处 grafl／ls系统tSpectrum是配有程序软件的 理脉冲、数据存贮 、显示 ，计算 出绝对值 ，并 临床用 FCM．Cytoflurogra[1／Is主要用于科 进行作 图、分析和调控)。 研f另一类是Coulter公司提供的 Epics—C和 (4)细胞分类纯化和 自动克隆系统 Epics—V两种，前者主要用于临床化验室，后者 由高频晶体、静 电偏转板、收集器 、细胞 适于科研；第三类是Bacton—Dickinson公司的 恒温装置、自动克隆装置等组成 ，细胞分类收 FACS～．它既可用于常规工作也适用于科研 。 集效率为每秒大于 5千个细胞 ，纯度为 97～ 99 ，通过收集容器的运动 ，使所需要的每个 一 、 FCM基本结构和样 品制备技术 细胞各 自落入一个孔，细胞分选和 自动克隆均 1．基本结构 在无菌封闭下进行 。 流式细胞仪一般是由光源、气控液流系统、 2．样品制备技术 光 电检测和计算机处理系统 细胞分类纯化和 一 般说来，测量仪器是不可能翻越掸品所 自动克隆系统四大部分组成 (见图 1)。 能提供的精度和分辨率的，FCM作为集激光、 (