动物实验基本方法.pptVIP

动物实验技术 万筱荣 实验动物基本概念 实验动物定义：经人工培育和人工改造,对其携带的微生物和寄生虫实行控制、遗传背景明确或者来源清楚，而用于科学研究、教学、生物制品或药品生产、鉴定以及其它科学实验的动物 实验动物分类 按遗传学分类：近交系、封闭群、杂交群。 按微生物学分类：普通级动物、清洁级动物、无特定病原体动物、无菌动物 普通级动物：不携带主要人畜共患病病原和动物烈性传染病的病原。 清洁级动物：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。 无特定病原体动物：除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。 无菌动物：无可检出的一切生命体。 实验动物的护理和使用原则 1、实验动物的饲养和使用应遵守国家有关的法律和规定。 2、应明确使用实验动物的理由和目的。 3、明确实验所使用动物的种类和数量，动物的数量应满足统计学的要求。 4、完善操作规程，避免或减轻因实验对动物造成的不适和痛苦。包括使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法；禁止不必要的重复。 5、严格按程序实施实验后动物的处理，包括麻醉、止痛、实验后的护理或用麻醉方法处死。 6、实验过程中要求保证实验动物的良好生活条件，包括饲养环境、符合需求的饲料及细心的护理等。 7、研究人员和实验动物操作人员应接受实验动物的基本知识和操作技能等方面的培训。 8、使用过程中要求保证周围环境和实验人员的安全。 实验过程的行为规范 1、物理限制 2、手术操作 3、饮食的限制 4、废弃物和尸体处理 物理限制： 是指在实验过程中（包括检查、收集标本、给药、治疗或实验操作等），用手或工具限制动物活动的过程。根据实验内容不同，限制时间有差异，但要求尽量缩短限制时间。有些动物，如狗和灵长类动物可以通过简单的训练达到目的. 物理限制的主要原则和要求包括： 限制的工具不能作为常规的饲养工具。 工具的设计应合理，不要仅考虑实验的便利，主要考虑尽量减少动物的不适，避免伤害。 尽量减少限制的时间，以达到实验目的为基准。 在限制过程中，如果发生损伤或严重的行为改变，应暂停或禁止限制，并给予处理或治疗。 保证实验人员和周围人员的安全。 手术操作 有些实验需要对动物进行手术，即打开或刺穿动物的身体，对动物的物理或生理机能产生较大的损害，同时，实验人员也容易被血液/体液污染或被器械、针头刺伤，存在潜在生物污染的威胁，因此必须做到： 操作一定要使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法。 禁止不必要的重复操作。 不提倡利用一个动物进行多个手术实验，但是，为充分利用动物资源，经动物伦理委员会许可，在可能的条件下可以实施。 严格实验操作规程，防止发生血液/体液外溅和针刺伤，避免生物污染。 手术后的动物、标本以及所用器具材料等必须按规定程序妥善处置。 饮食的限制 实验用动物原则上要求随时饮食，如果一些实验需要动物限制食物或水的摄入量，应保证动物存活所需要的最低需求量。根据研究的目的，食物的限量应经过科学的论证，其限量的标准应容易操作，如正常摄入量的百分比或动物体重的百分比。对于水分的限量摄入，一定要防止动物发生脱水现象，并要保持动物的膳食平衡。 废弃物和尸体处理 1．动物尸体的处理 安乐处死后的动物尸体，取材完毕后，经121℃ 30min高压灭菌处理后，集中送环保部门处理。动物生物安全三级（animal biosafety level 3, ABSL-3）实验室及以上级的实验室的感染动物尸体需经室内和双扉两道高压灭菌，才能移出实验室。 2. 动物咽拭子的处理 用于病原分离和PCR检测的咽拭子，按照各自的要求处理后，进行病毒分离和PCR检测，剩余的标本经121℃，30min高压消毒处理。 3. 病原分离培养物的处理 病原分离的培养物，不论是阳性还是阴性结果，均需经121℃，30min高压消毒处理。 选择实验动物基本原则 尽量选择研究对象的功能、代谢、结构及疾病与人类相似的动物； 解剖、生理特点符合实验目的要求； 实验动物不同品种品系的特点； 选择标准化实验动物； 符合实验动物选择的一般原则； 经济性原则； 要考虑到动物实验结果的外推； 注意有关国际规范。 动物实验基本技术 小鼠的捉持 大鼠的捉持 豚鼠的捉持 兔的捉持 犬的捉持 灌胃给药——大小鼠 灌胃给药——兔 皮下注射给药——大小鼠 静脉注射给药——大小鼠 静脉注射给药——犬 静脉注射给药——兔 不同种类实验动物一次给药能耐受的最大容量（ml） 人与动物用药量换算 一般可按下列比例换算： 人用药量为1，小鼠、大鼠为25-50倍，兔、豚鼠为15-20倍，犬猫为5-10倍。 此外，可以采用人与动物的体表面积计算法来换算。 二、实验动物的采血 尾尖采血