1、电子显微镜原理(2015年新).ppt

第二章:超薄切片技术第一节:取材第二节:固定和固定剂第三节:脱水第四节:浸透和包埋第五节:超薄切片 第三章:电子染色技术第一节:电子显微镜标本的正染色第二节:电子显微镜标本的负染色第三节:半薄切片染色 第四章:扫描电镜生物样品制备技术第一节:取材和标本的预处理第二节:生物样品的干燥第三节:生物样品的导电法 一、概 述 电镜具有很高的分辨本领,能观察极微小的结构。但是电镜不能直接观察天然状态下的生物标本,必须通过各种技术将生物标本制成特殊的电镜生物样品,才能放入电镜进行观察,这些电镜样品制备技术称为电子显微术。 电镜能在生物医学领域中广泛使用,在很大程度上是由于电子显微术的改进和发展。电子显微术种类很多,这里仅介绍几种常用的技术。 通过多种电子显微术的配合----能了解生物样品的化学组成、形态结构和生理功能的关系。 电镜技术----无论在生物技术的基础研究中、还是在临床医学, 都有着广阔的发展前景。 一、电子显微镜的概况 透射电镜的点分辨率达到了2-3A,晶格分辩率已达到1A左右,已使人们能用电镜直接观察原子象； 除透射电镜外,发展了多种电镜,如扫描电镜、扫描透射电镜、分析电镜等,使我们能对样品进行综合研究。 （一）透射电镜 透射电镜----是利用电子射线穿透样品后放大而成像的一种电镜。 主要优点----分辨率高,可用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貌,在生物医学上的应用最为广泛。 加速电压----一般透射电镜（加速电压小于120KV）,高压透射电镜（加速电压在120KV与500KV之间）,超高压透射电镜（加速电压大于500KV）。 1、一般透射电镜：就是最常用的100KV电镜。 这种电镜的分辨率高(点3A,晶格1.4A),但穿透本领小,观察样品必须很薄,如小于0.1微米的超薄切片、负染样品和复型膜等。 这种电镜在生物医学上的应用已相当普及。 3、超高压透射电镜：已有500KV、1000KV和3000KV的超高压电镜。 这种电镜具有穿透能力强、辐射损伤小、可以配备环境样品室及进行各种动态观察等优点,分辨率也已达到或超过100KV电镜的水平。 在超高压电镜上附加充气样品室,使人们有可能观察活细胞内超微结构的动态变化,对生物医学工作者很有吸引力。这种电镜庞大而且昂贵,远非一般实验室所能装备。 东京大学工学院125万伏超高压电镜（JEOL–ARM–1250），该电镜价值1000万美元，有三层楼那么高，是世界上精确度最高的电镜之一，主要用于原子结构和物质的特性研究。 该电镜的开放管理时，该电镜的技术工作委员会主任市野漱告诉我们，他的电镜每天24小时向“全世界”开放。 尽管是高精度特大型电镜，他们仍然实行用户经培训合格后自行上机的开放模式。 原则上，电镜实行测试收费管理，但他们电镜开放的重点是从事高水平的测试服务与科学研究。 用户的样品不需要在这样高水平的电镜上测试，即便是付费，他们也不予测试，因为这等于是浪费了高水平的资源。相反，如果用户提出的样品或课题有很高的学术、科学技术价值，即便资费不够，他们也会主动接受。每年提供3％的运行费用。 可以根据用户项目水平的高低，他们可以采用合作方式开展测试研究，甚至免费提供测试和研究。正由于他们有这样的开放与合作原则，多年来，他们的电镜在高水平研究方面发挥了重要作用，取得了许多世界一流的学术成果。 用户提出的样品和研究有很高的价值，他们甚至可以提供几个月的免费食宿和测试，开展合作研究。正因为如此，他们也做出了很多高水平的成果，在全世界的同行中享有很高的知名度。 国外实验室倡导电子显微镜室对外开放： 1、高年级学生 2、研究生 3、博士生 4、科研人员 （二）扫描电镜 扫描电镜是利用电子射线轰击样品表面,引起二次电子等信号的发射,经检测装置接收后成像的一种电镜。特点是景深长,所获得的图象立体感强,可用来观察生物样品的各种形貌特征。 在生物医学中,采用不同的样品制备技术可观察不同的结构,如用临界点干燥方法可观察样品的表面形貌； 用冷冻割裂方法可观察样品割裂面的结构,用铸型方法可观察管腔内表面的结构等。 1、?一般扫描电镜 目前一般商品扫描电镜采用热发射电子枪,分辩率为60A左右,若采用六棚化镧电子枪,分辨率可提高到40-50A。 这种电镜在生物医学中的应用也已相当普及。 （四）扫描透射电镜 扫描电镜中电子射线作用于样品后,其中一部分电子可透过样品成为透射电子,将透过样品的透射电子和散射电子用检测器接收成像,即成为扫描透射电