Saxiphilin蛋白分离纯化及其活性测定.pdfVIP

第22卷 第2期 宁 波 大 学 学 报 (理 工 版 ) 、，o1．22 No．2 2009年 6月 JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE) June 2009 文章编号：1001—5132(2009)02—019I一05 Saxiphilin蛋白分离纯化及其活性测定 何 仲，欧昌荣 (宁波大学 生命科学与生物工程学院，浙江 宁波 315211) 摘要：Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素(PSPs)特异性结合的可溶性血清蛋白，利用超滤离心 及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化 Saxiphilin活性蛋 白使其达到一定纯度，通过酶联免疫检测技 术对其活性进行研究．结果表明：分离纯化 目标蛋 白时，采用pH值为6．5的Tris—HCI缓冲液，使 用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为 5．9和 11．2，回收率为 67．8％和 50％．通过 SDS．聚丙酰胺凝胶 电泳验证其分子量为 90kDa，并通过毒素粗蛋 白的结合曲线可得粗蛋 白与 PSP浓度比达到 46．86时，目标蛋白结合 PSP毒素的量达到饱和．将 Saxiphilin蛋白应用于微量 滴定板来检测PSPs，具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点． 关键词：Saxiphilin蛋白；麻痹性贝类毒素；纯化；活性 中图分类号：TS254 文献标识码：A Saxiphilin是一种可溶性血清蛋白，其最初是 与麻痹性贝类毒素结合的功能，但是 Saxiphilin蛋 由YiLi等…从牛蛙血浆中分离出来，随后研究人 白在性质和氨基酸序列方面完全不同于 VGSC， 员在节肢动物、两栖动物、爬行动物和鱼类等体内 VGSC能同时结合麻痹性贝类毒素(PSPs)与河豚毒 发现相类似活性物质}2】．它在结构上与转铁蛋白相 素(TTx)，而Saxiphilin只能对STX、脱氨甲酰基类 似，是由2个结构相似分别位于N端和C端的球形 毒素(dc—STX)等PSPs毒素高度亲和，但对 TTx不 结构域组成的单一肽链 】． 敏感．其高度的亲和力、对各种 PSPs非选择陛结 一 些研究人员推测Saxiphilin是一种与转铁蛋 合及对 TTx的不敏感陛，使研究者认为 Saxiphilin 白相关的进化蛋白，由于对环境的不适应，发生基 可代替钠通道受体来研制检测 PSPs的固相微滴定 因突变，使转铁蛋白c端的Fe结合位点取代为与 板4【】ILlewellyn等 【】已将来自蜈蚣血浆的Saxiphilin STX结合的位点，从而使蛋白c端的单一位点能 应用于微量滴定板来检测 PSTs，其检测灵敏度可 与STX相结合．Saxiphilin分子量约为89kDa，碱性 达 1．3mgSTXeq-(1oog)～，是检测贝类提取液中PSP 等电点为 10．3～1O．7，Saxiphilin在血浆中的浓度约 的高效诊断器．作者主要是从牛蛙血浆中分离纯化 为0．38×10 mol或0．028 0．034mg．mLf¨． Saxiphilin活性蛋白，使其达到一定纯度，通过酶 Saxiphilin蛋白与钠离子通道(VGSC)蛋白都有 联免疫检测技术对其活性进行测定． 收稿 日期：2008-05—09． 宁波大学学报 (理工版 )网址：http：／／3xb．nbu．edu．cn 基金项目：浙江省自然科学基金重大项 目(2004A610014)：宁波市科技局项目(Y3052821)． 第一作者：何 仲 (1984一)，女，浙江乐清人，在读硕士研究生，主要研究方向：水产品贮藏与加工．E-mail：zjlxyhezhong@yahoo．corn．cfl 通讯作者：欧昌荣 (1974一)，男，湖北天门人，博~／N教授，主要研究方向：食品安全与检测．E-mail：ouehangrong@nbu．edu．ca