质谱的原理和仪器构造.pptVIP

MALDI采用脉冲式的激光，在一个很微小的区域里，以极短的时间间隔(纳秒级)，打在靶物上，避免样品加热分解。它的方法是将被测物(μ mol/L级的浓度)的溶液和基质(m mol/L级的浓度)溶液混合。蒸发溶剂，被测物质与基质成为晶体或半晶体。用一定波长的脉冲式激光进行照射。基质分子能有效地吸收激光的能量，使基质分子和样品投射到气相并得到电离。常用的基质有2，5-二羟基苯甲酸、芥子酸等。 MALDI特点：是碎片离子峰少，有分子离子、准分子离子及样品分子聚积的多电荷离子。适合分析蛋白、多肽、多聚糖等生物领域。 5.大气压电离 (Atmospheric Pressure Ionisation, API) API技术是当今质谱界最为活跃的领域，它的成功发展，扩展了质谱仪分析化合物的范围，特别是在生物化学、医学、药物代谢等领域获得日益广泛的应用。 API包括了电喷雾电离(Electrospray, ESI)和大气压化学电离(Atmospheric Pressure Chemical Ionisation ,APCI)两种。它们的共同点是样品的离子化在处于大气压下的离子化室中完成，离子化效率高，大大增强了分析的灵敏度、稳定性，它们是目前最软的离子化技术。这二种方式都可以获得与分子离子有关的信息而得到化合物的分子量。 电喷雾电离源（Electro spray ionization, ESI)的原理： ESI技术电离过程是“离子雾化”。样品溶液流出毛细管的瞬间，在加热温度，雾化气(N2)和强电场(3-5kv)的作用下。溶剂迅速雾化并产生高电荷液滴。随着溶剂分子的蒸发，带电液滴的半径逐渐缩小，液滴表面的电荷密度逐渐增大。当电荷之间的排斥力足以克服表面张力时，离子向表面移动并从表面蒸发，产生单电荷或多电荷离子。所带电荷的多少取决于所得的带正电荷或负电荷的离子中酸性或碱性基团的体积和数量。 通常小分子得到[M+H]+、[M+Na]+或[M-H]-单电荷离子。而生物大分子则产生多种多电荷离子，在质谱图上得到多电荷离子的峰簇。因此质量范围只有几千质量数的质谱仪能够检测质量数几万甚至十几万的生物大分子如蛋白质、寡核苷酸等。 ESI是最软的电离技术。适合测定极不稳定的极性化合物、如多糖、蛋白等。 大气压化学电离(atmospheric pressure chemical ionization, APCI)的原理 溶液中的样品流出毛细管时被氮气流雾化，到加热管中被挥发，在加热管端进行电晕(Corona)尖端放电，电极的高压使溶剂分子被电离，形成反应气等离子体。样品分子在穿过等离子体时通过质子转移被电离形成[M+H]+或[M-H]-离子，并进入质谱仪。 在电晕放电电离的设计中，取样微孔与电离反应区之间增加了层幕气流，避免微孔堵塞，又能使簇合离子解簇。 APCI适合于弱极性小分子化合物。 六．串联质谱(tandem MS) 为了得到更多的有关分子离子和碎片离子的结构信息，早期的质谱工作者把亚稳离子作为一种研究对象。所谓亚稳离子(metastable ion)是指离子源出来的离子，由于自身不稳定，前进过程中发生了分解，丢掉一个中性碎片后生成的新离子，这个新的离子称为亚稳离子。研究亚稳离子对搞清离子的母子关系，对进一步研究结构十分有用。由于亚稳离子形成的几率小，亚稳峰太弱，检测不容易，而且仪器操作也困难，因此，后来发展成在磁场和电场间加碰撞活化室，人为地使离子碎裂，设法检测子离子，母离子，进而得到结构信息。这是早期的质谱-质谱串联方式。 随着仪器的发展，串联的方式越来越多。尤其是20世纪80年代以后出现了很多软电离技术，如ESI、APCI、FAB、MALDI等，基本上都只有准分子离子，没有结构信息，更需要串联质谱法得到结构信息。因此，近年来，串联质谱法发展十分迅速。 串联质谱可用MS/MS表示，随着串联级数的增强可表示为MSn, n：表示为串联级数。 串联质谱技术的优点： 1.选择性更高 2.检测限更低 3.谱图质量更好 4.大大减少样品的提纯 5.得到更多的结构信息 串联质谱技术的用途 1.微量样品的检测 2.脏样品的分析 3.同分异构体的区分、化合物结构鉴定等等 串联质谱分类： 1．空间上的串联： 两个以上的质量分析器联合使用，两个分析器间有一个碰撞活化室，目的是将前级质谱仪选定的离子打碎，由后一级质谱仪分析。这种串联质谱可以完成三种扫描方式 (1)子离子扫描 — 第一级质谱选择出的某质荷比的离子，通过碰撞室与惰性气体(He,Ar,)等分子发生碰撞诱导断裂，生成若干产物离子，再第二个质量分析器测定，得到产物离子的质谱图。 (2)母离子扫描 — 即由第一个质量分