HIV病毒检测方法及其检测试剂盒.docVIP

(54)发明名称 HIV病毒RT-LAMP-LFD检测方法及其检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种HIV病毒RT-LAMP-LFD检测试剂盒及其检测方法。该检测方法是根据GenBank公布的HIV病毒序列的保守区域设计HIV RT-LAMP-LFD反应系统所需引物与探针;采用本发明人配制的RNA提取试剂提取HIV病毒RNA，使用本发明建立的RT-LAMP反应体系进行检测，依据反应体系加入的检测探针，在反应结束后利用核酸快速检测试纸判定结果。同现在HIV病毒的常用检测技术相比，本发明有助于实现早期诊断，避免漏检，提高检测的灵敏性、缩短，是HIV诊断方法持续发展的主要方向firee water. 引物HIV-FIP序列见SEQ ID N0 :1，引物HIV-BIP序列见SEQ ID N0 :2，引物HIV-F3序列见SEQ ID N0:3，引物HIV-B3序列见SEQ ID NO:4，探针HIV-FITC-PROBE序列见SEQ ID N0 :5 7.根据权利要求6所述的HIV RT-LAMP-LFD检测试剂盒，其特征在于: 引物HIV-FIP序列见SEQ ID N0 :1，引物HIV-BIP序列见SEQ ID N0 :2，引物HIV-F3序列见SEQ ID N0:3，引物HIV-B3序列见SEQ ID NO:4，探针HIV-FITC-PROBE序列见SEQ ID N0 :5 8.根据权利要求6所述的HIV RT-LAMP-LFD检测试剂盒，其特征在于:HIV病毒LAMP-LFD检测试剂盒还配有LFD试纸用的缓冲液、阳性对照样品和阴性对照样品，其中LFD试纸用的缓冲液为1xTAE缓冲液，阳性对照样品为HIV基因组病毒RNA，阴性对照样品为无核酸的RNase firee water HIV病毒RT-LAMP-LFD检测方法及其检测试剂盒 技术领域 [000l] 本发明涉及哺乳动物病毒检测领域，特别涉及一种人体HIV病毒RT-LAMP-LFD检测方法及其检测试剂盒。 背景技术 [0002] HIV即人类免疫缺陷（Human Immunodeficiency Virus，HIV），顾名思义它会造成人类免疫系统的缺陷。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），属反转录病毒的一种。至今无有效疗法的致命性传染病。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病（获得性免疫缺陷综合征）人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈球形。病毒外膜是类脂包膜，来自宿主细胞，并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41；gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并与gp41通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形成的球形基质（Matrix），以及蛋白p24形成的半锥形衣壳（Capsid），衣壳在电镜下呈高电子密度。衣壳内含有病毒的RNA基因组、酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶）以及其他来自宿主细胞的成分有助于实现早期诊断，避免漏检，提高检测的灵敏性、缩短，是HIV诊断方法持续发展的主要方向firee watero 引物HIV-FIP序列见SEQ ID N0 :1，引物HIV-BIP序列见SEQ ID N0 :2，引物HIV-F3序列见SEQ ID N0:3，引物HIV-B3序列见SEQ ID NO:4，探针HIV-FITC-PROBE序列见SEQ ID N0 :5 [0015]作为优选，引物HIV-FIP为5端生物素标记引物;探针HIV-FTIC-PROBE为5端FTIC标记探针。 [0016]作为优选，HIV病毒RT-LAMP-LFD检测试剂盒还配有LFD试纸用的缓冲液、阳性对照样品和阴性对照样品，其中LFD试纸用的缓冲液为1 x TAE缓冲液，阳性对照样品为HIV病毒基因组RNA，阴性对照样品为无核酸的RNase firee water [0017]本发明的有益效果是: 1、本发明所采用引物组是根据HIV衣壳蛋白基因的六个不同区域设计的，又有RNA的特异性探针相结合，特异性比常规PCR强。 [0018] 2、本发明的检测试剂盒检测灵敏度高，是常规PCR的102-103倍。 [0019] 3、本发明的检测试剂盒检测时间短，可以在30-60min内获得检测结果，比常规 PCR节约3.5-4.5小时。 [0020] 4、本发明的检测试剂盒对仪器设备要求低，不需要普通PCR所用的PCR仪、凝胶电泳和成像系统。 [0021] 5、本发明中的病毒RNA提取方法简单快捷，而且不用到氯仿、巯基乙醇等有害物质。 [0022] 6、本发明的检测试剂盒操作步骤简单，结果直观易判定。 [0023] 7、本发明的检测试剂