定量分析与方法验证(研究生）.ppt.pptVIP

第二节 药物分析方法的验证 需验证的项目 验证的内容 准确度 定量限 防腐剂 溶出度,释放度 鉴别试验 杂质检查 含量测定 精密度 专属性 检测限 线性 范围 耐用性 重复性 中间精密度 重现性 一、分析方法验证的内容 (一) 准确度 (五) 定量限 (二) 精密度 (六) 线性 (三) 专属性 (七) 范围 (四) 检测限 (八) 耐用性 2. 验证方法 (1) 含量测定 ① 基质无(原料药)/可模拟(制剂) ② 基质不可模拟(制剂,中药) (2) 杂质检查——方法同② 3. 数据要求 9个测定结果(n=9) 3水平×3样品 化药: ① 80, 100, 120％ ② 1:0.8, 1:1, 1:1.2 中药: 1:0.5, 1:1, 1:1.5 准确度系指用该方法测定的结果与真实值 或参考值接近的程度 一般用回收率(%)表示 1. 定义 (一) 准确度 2. 验证方法(其他方法) 可与已知准确度的另一方法的测定结果比较 ——药典标准方法 / 经过验证的方法 也可由所测定的精密度、线性和专属性推算 ——原料药含量HPLC测定法 (一) 准确度 3. 数据要求: (一) 准确度 样品中被测成分的含量水平 与回收率限度 要求的关系 含量水平 限度(%) 含量水平 限度(%) 100 % 98~101 0.01 % 85~110 10 % 95~102 10 ?g/g (ppm) 80~115 1 % 92~105 1 ?g/g (ppm) 75~120 0.1% 90~108 10 ?g/kg (ppb) 70~125 1. 定义: 同一均匀供试品多次取样测定 所得结果之间的接近程度 相对标准偏差(%, RSD); 置信区间( ) 2. 分类: 重复性: 同一实验室 / 相同环境(仪器, 人员, 批次) 中间精密度: 同一实验室 / 不同环境 重现性(法定方法): 不同实验室 / 不同环境 (二) 精密度 3. 验证方法 (二) 精密度 重复性——相同条件连续测定所得结果的精密度 中间精密度——不同仪器、人员、分析批(时间) 重现性——不同实验室 操作法: 同准确度, 通常: 3(水平)×3(样品)=9(数据) 4. 应用——定量分析 (二) 精密度 主成分含量测定 化药原料药/制剂——80%~120%(样品, n=9) 中药材(饮片)/制剂——100%(样品, n=6) 50%~150%(样品, n=9) 杂质定量测定 实际样品(100%水平, n=6) 标准添加(50%~150%限度水平, n=9) 5. 数据要求: (二) 精密度 样品中被测成分的含量水平 与精密度可接受限度 要求的关系 含量水平 重复性(RSD%) 重现性(RSD%) 含量水平 重复性(RSD%) 重现性(RSD%) 100% 1 2 0.01% 4 8 10% 1.5 3 10?g/g 6 11 1% 2 4 1?g/g 8 16 0.1% 3 6 10?g/kg) 15 32 鉴别反应 空白 结构相似物 或有关物质 呈负反应 含量与杂质测定 ——含杂质或降解产物的试样中各峰能获得分离 在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能 存在下,方法能正确测定出被测物的特性 鉴别,杂质检查和含量测定方法 定义与应用 (三) 专属性 目视法评价的方法: 化学反应 / TLC ——鉴别的显色法; 杂质检查的TLC 1 直观法 显示信号与噪声水平的方法: HPLC ——S/N=3(2) 时的相应浓度或量 2 信噪比法 3 标准偏差/ 标准曲线 其他分析方法: UV-Vis法 (四) 检测限 检测限(limit of detection, LOD)——是指试样中 被测物能被检测出的最低浓度或量 LOD是一种限度检验效能指标, 反映方法的灵敏度 δ空白响应偏差 S 标准曲线斜率 定量限(limit of quantitation, LOQ )——是指试样 中被测物能被定量测定的最低浓度或量 LOQ是一种定量检验效能指标, 反映方法的灵敏度 测定结果具有一定准确度和精密度 (验证要求) 杂质/降解产物用定量方法研究: 应确定LOQ 测定方法与LOD相同——系数不同, 如S/N=10 (1) (2) (3) (五) 定量限 线性——在设计的“范围”内, 响应值(y)与被测物浓度 (x)直接呈正比关系的程度 y = ax + b 系列(n≥5) 水平(浓度)标准; 线性回归 (或经数学转换) 定量基础: 含量测定; 杂质/组分/