免疫组化与组织切片论文.docVIP

免疫组化技术现状研究 张小虎 （甘肃农业大学动物医学院 预防兽医系 兰州） 摘要：随着现代医学科学的飞速发展，新的技术方法，其中免疫组织化学技术以其特异性、敏感性强及操作简便等优点得到了最为广泛的推广和应用。它不仅提高了病理诊断的准确性，也渗透到了基础和临床医学中，在探讨疾病的病因学、发病机制及科研工作中起到了不可估量的作用。本文就该技术的原理、特点、标准化及其在应用过程中存在的问题进行综述。 关键词：免疫组化技术，特点，应用，存在问题，改进方法，标准化 免疫组化技术的原理及特点 1.1原理 免疫组化技术是在组织化学的方法上结合免疫学的理论和技术发展起来的一门新技术。其原理是利用免疫学的核心——抗原体特异性结合的原理，用标记抗体追踪抗原，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等显示一定的颜色，并借助显微镜、荧光显微镜、电镜对其颜色进行观察，以达到检测抗原物的目的[1]。 1.2特点 （1）特异性强：“一对一”特异结合，如CK显示上皮成分，LCA显示淋巴成份，只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应[1,2]。 （2）敏感性高：在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，那时的抗体只能稀释几倍到几十倍，现在由于技术的革新使抗体稀释上千倍到上万倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化的方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作中[1,2]。 （3）定位准确、形态与功能相结合：免疫组化可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可以同时对不同抗原在同一组织和细胞中进行定位，这样就可以进行形态和功能相结合的研究，对于病理学研究的深入十分有意义[2,3]。 2. 免疫组化技术的应用 (1)提高病理诊断的准确性。自从有了免疫组化技术，为病理诊断提供了客观指标[4],大大提高了疑难病例诊断的准确性，据统计，约有50%-80%的疑难病例获得了正确诊断。 (2)病原微生物的检查：人体疾病的致病微生物中有的在常规病理检查中不易发现，尤其是病毒性致病微生物，通过免疫组化方法则可明确发现病原体抗原的部位以及定位。 (3)确定肿瘤的分化程度。肿瘤细胞增生是否活跃直接影响着临床治疗与预后。利用免疫组化方法对瘤细胞增生抗原进行定量最为简单、可靠。肿瘤增生抗原与许多肿瘤的预后相关，即ki67或PCNA阳性细胞多者，其恶性度高，预后不良，其中以淋巴瘤、乳腺癌较为明显。 (4)雌孕激素受体的检测为临床提供治疗方案[5]。免疫组化技术可对肿瘤内的各种激素受体进行定位、定量分析，为临床提供治疗方案。 (5)癌基因蛋白的研究。癌基因活性的异常可通过mRNA瘤蛋白(oncoprotein)的水平增加表达出来。免疫组化技术对这些瘤蛋白进行定位、定量分析，以探讨其临床意义。 (6)指导肿瘤的治疗。近年来一些研究发现,某些肿瘤对化疗不敏感，原因可能是肿瘤细胞内多药耐药基因(multidrug resistance gene)编码的酶的活性增加所致。免疫组化对这些酶或糖蛋白进行检测，了解肿瘤是否有抗药性。 （7）其他：免疫组化技术对肿瘤细胞增生程度的评价、发现微小转移灶及肿瘤的分期上也有十分积极的意义。 3.免疫组化技术常见问题及应对策略 良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提，免疫组化切片的质量直接影响着诊断结果的判断。因此制作良好的免疫组化切片至关重要。由于免疫组织化学切片制作过程存在很多步骤和环节，每一个步骤和环节都可能影响最终检测结果[6]，故制作一张高质量的免疫组织化学切片并不是一件容易的事。真阳性染色结果应表达在预期对应的组织细胞中，定位清晰准确，间质清楚，无背景着色。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，通过综合各大实验室的实践经验，针对免疫组织化学制片过程中出现的常见问题进行了分析，并提出了切实可行的对策。 3.1脱片 脱片是免疫组织化学检测中最常遇到的现象之一，主要是由于玻片处理不当、切片太厚、组织处理欠佳或组织的特殊特性所致。针对这些问题，应该将玻片彻底清洗干净，即将新购买的载玻片一片一片地放入洗衣粉水中浸泡 10h 左右；自来水冲洗干净；蒸馏水冲洗 2 遍，烤干；浸泡防脱片剂多聚赖氨酸，烤干备用。切片以 2-3μm 为宜，漂片要平整，不能有皱褶、气泡，并需60℃烤 15h 以上。固定脱水欠佳的组织如需进行微波修复亦易导致脱片。因此，组织应及时固定，脱水充分，透明浸蜡适度。应尽量切薄，延长烤片时间，缩短抗原微波修复时间和选用适当的抗原修复液[7]。对于骨组织和纤维成分较多的乳腺、皮肤等组织应将切片最好不超过2μm 厚，必要时切片后先微波 1-2min，再烤片，使组织粘贴牢固。 3.2假阴性 免疫组织化学染色切片中无阳性信号，有两种可能：