SOP-SC-011-01 白细胞样本分离操作规程.PDFVIP

最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 最佳实践规范及标准操作流程 文件汇编 （第二版） 2010年5月 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 质量管理体系文件 文件名称 白细胞样本分离操作规程 编号 SOP-SC-011-01 批 准 人 批准日期 实施日期 白细胞样本分离操作规程 1.目的 规范血液样本采集后，使用密度梯度离心法分离白细胞的操作规程。 2.适用范围 本规程适用于从使用抗凝剂的全血中分离白细胞，分离后的白细胞标本可用 于细胞培养、染色、核酸抽提等研究。 3.定义和术语 3.1 血浆 血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成 分的液体，其中含有纤维蛋白原。 3.2 白细胞 白细胞是血液中的一类细胞，人体血液及组织中的无色细胞，有细胞核。根 据形态特征可分为粒细胞、淋巴细胞核单核细胞。 3.3 淋巴细胞分离液 淋巴细胞分离液具有低粘度、低渗透压、无毒等特点，密度为1.077g/L,可 基于密度梯度离心的原理分离血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)。 3.4 二甲基亚砜 DMSO 二甲基亚砜 DMSO 一种透明、无色、无臭、呈微苦味的液体，毒性极低。可 作为冻存剂广泛地应用于各种细胞的低温保存。 3.5 RNAlater RNAlater 是一种样品储存液，采样后将样品浸入这种溶液中，RNAlater 可 以迅速渗透到组织或其他生物样本中，稳定并保护RNA完整而不被降解。 3.6 程控降温仪 1 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 在细胞冻存的过程中，液态水转化为冰，冷冻速率太快或太慢，容易导致细 胞内水分丧失或形成大冰晶，都不利于细胞存活。通过使用程控降温仪，选择合 适的冻存液，设定合适的升降温速率，可有效地克服上述不利因素。每分钟1-3 ℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。 4.职责 4.1样本管理员 对抗凝血进行白细胞分离。 5.设备和器材 5.1 个人防护装备 手套、口罩、实验防护服、护目镜及其它相关防护装备。 含有漂白剂的废液缸。 5.2 容器 无菌可立冻存管、离心管、玻璃移液管及玻璃吸管。 5.3 仪器设备 与离心管配套的高速水平吊篮式冷冻离心机。 移液器及无菌的枪头。 超净工作台。 程控降温仪。 5.4 试剂 75%医用酒精、无菌细胞培养液 （RPMI1640）、淋巴细胞分离液 （Ficoll）、 二甲基亚砜（DMSO）、胎牛血清（FCS）、RNAlater试剂及PBS（新鲜配制）。 冻存剂保护液的配置：分离白细胞前，预先配置冷冻的冻存剂保护液（10% DMSO + 20% FCS + RPMI1640）。 6.主要流程 6.1 白细胞分离 6.1.1血液样本采集的过程请参见《血液样本采集操作规程》中的具体流程。 6.1.2 分离血浆的过程参见《血浆样本分离操作规程》,与此同时淋巴细胞 分离液和细胞培养液RPMI1640预热至室温。 2 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 6.1.3提取