健康妇女下生殖道解脲脲原体及其分群分型研究.pdfVIP

◇!冀．驰 健康妇女下生殖道解臊臁原体及其分群分型研究 摘要 法(FQ．PCR)属于分子生物学方法，是国外近年发展起来的新的核酸检测技术， 具有敏感性好、自动化和程序化、速度快等优点，适合大样本临床应用。 而在UU的分型方法学上，基于抗UU血清型单克隆抗体的血清学分型研究发 展最早，但由于抗血清制备繁琐，不同抗血清型的单克隆抗体之间有不同程度的 交叉反应，缺乏可重复操作性，在临床上一直未得到广泛应用。目前的热点在基 于多条带抗原(MB抗原)基因的UU分群或分型研究。MB抗原是UU的主要外膜 抗原，MB抗原基因既包含有血清分群，也包含有各个血清型确定性区域，因而 被选择作为特异性目标序列加以扩增。我们根据UU各标准菌株的MB抗原基因间 序列差异自行设计引物和探针，使用反相斑点杂交分析法(RDB)对UU进行分 型。 研究目的 本研究采用FQ—PCR方法进行宫颈分泌物UUDNA检测，了解健康妇女下生 殖道Uu携带情况和定量值；采用RDB法进行UU血清型鉴定，揭示正常携带状态 下UU的血清型分布，以获得健康妇女下生殖道UU血清型的流行病学资料，为其 防治和进一步深入研究打下基础。 材料与方法 1研究对象 选择2005年4月～8月在中山大学附属第二医院体检中心进行体检的妇女，无 泌尿生殖道炎症症状，妇科检查阴道粘膜粉红色，白带清白或淡黄色，量少或量 中，无明显阴道炎体征，年龄≤55岁。选择符合上述标准者1018侈0，全部病例 详细登记病史，常规妇科检查。 2、荧光定量检测 1018例体检妇女用棉拭子取样法采集宫颈管分泌物标本，提取DNA，用 PE9700荧光定量PCR仪进行UU、CT荧光定量检测。 3、反相斑点杂交 采用RDB法对uU阳性的标本进行分群和血清型鉴定。 4、阳性标本的DNA序列测定 Il ◇!．i，毛曼 健康妇女下生殖道解脲脲原体及其分群分型研究 摘要 临床检测分出血清型的阳性标本，随机抽取18份行DNA测序以证实RDB检 测方法的正确性。 结果 1、解脲脲原体的荧光定量检测结果 占4．3％)，此外，检出CT阳性80例占7．9％。UU阳性、阴性妇女平均年龄比较差 异有统计学意义。UU阳性妇女的妊娠次数、流产次数与阴性妇女比较差别有统 计学意义。随着妊娠次数、流产次数逐渐增多，UU的阳性率呈逐渐上升的趋势。 随着宫颈糜烂程度逐渐加重，UU的阳性率呈逐渐上升的趋势。UU阳性妇女的分 娩次数、职业构成及节育措施构成与阴性妇女比较差别无统计学意义。 1．2 371例uu阳性标本中，FQ．PCR1×106319例(86．0％)， copy／ml FQ—PCR≥1×106 copy／ml 合C-T口Et性44例(11．9％)。下生殖道uu FQ．PCR 的妇女高(9．4％)，差别有统计学意义(P=O．ooo)。 1．3将资料作二分类Logistic回归分析，筛选出对uu阳性有显著性意义的 影响因素为： 值为2．462，P=0．000；≥3次流产的OR值为2．734，P=0．005。 (2)年龄，OR值 为0．969，P=0．001。整个回归模型检验x2=32．777，P=O．000，有统计学意义。 2、解脲脲原体血清型检测结果 2．1 371例UU阳性标本，可以检测出血清型的共337例，未检出34例，总检 3型单型别阳性81例(29．1％)，血清6型单型别阳性11164(39．9％)，血清14 Ill ◇!，，÷：! 健康妇女下生殖遘解脲脲原体及其分群分型研究 摘要 意义(P=0．000)。 3、阳性标本的DNA序列测定