教案7-1：染菌的防治.ppt

有机酸生产技术 生物工程系 谷氨酸发酵生产技术 第七章 染菌的防治 第一节 染菌的危害、途径及原因分析 第二节 噬菌体污染的防治 第三节 杂菌污染的防治 主要内容 一、染菌的危害 二、染菌的异常现象 三、染菌的途径 四、染菌的原因分析 一、染菌的危害 轻者影响产率，产物提取收率和产品质量；严重者造成“倒罐”，浪费大量的原材料，造成严重的经济损失，而且扰乱生产秩序，破坏生产计划。 可能会出现以下一种或几种危害： ①使培养基因杂菌的消耗而损失，造成生产能力下降； ②杂菌合成一些新的代谢产物，或杂菌污染后改变了发酵液的某些理化性质，使发酵产物的提取和分离变得困难，造成产物收率降低或产品质量下降； 一、染菌的危害 ③杂菌代谢改变发酵液pH值，使发酵发生异常变化； ④杂菌分解产物，使生产失败； ⑤细菌发生噬菌体污染，细胞被裂解，导致整个发酵失败等。 据报道，国外抗生素发酵染菌率为2%～5%，国内的抗生素发酵，如青霉素发酵染菌率为2%，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率约为5%，谷氨酸发酵噬菌体感染率为1%～2%。 一、染菌的危害 氨基酸发酵中，染菌的危害程度往往与污染时间、污染杂菌种类以及污染程度有关，必须综合这些因素进行衡量。 1、不同发酵时期染菌对发酵的影响 种子培养期染菌：培养基营养丰富，容易染菌，而且种子染菌对发酵危害较大，应严格控制种子污染。注意控制种子质量，严防种子污染。 发酵前期染菌：较容易染菌，污染后杂菌迅速繁殖，与生产菌争夺营养成分和氧，严重抑制生产菌的生长繁殖，最终导致产物的积累大大减少，甚至造成发酵失败。早发现，快处理。 发酵中期染菌： 危害极大，不但影响生产菌的继续生长，还会严重干扰生产菌的产物合成代谢，减少产物的生成。而且由于营养成分大量消耗，发酵产物正在大量积累，一般挽救处理困难，危害性很大。故在实际生产中应做到早发现快处理。 发酵后期染菌：发酵后期产物积累较多，营养接近耗尽，此时染菌影响相对小些，一般可继续发酵；若污染严重，可采取提前放罐来减少损失。 2、污染杂菌种类的影响 （1）污染噬菌体 噬菌体的感染力强，传播蔓延迅速，也较防治，故危害极大。 污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被迫停产。 氨基酸生产菌多为细菌，发酵前期污染噬菌体，发酵无法进行，重新灭菌处理后的培养基黏度大，提取困难。一般发酵后期不会感染噬菌体。 （2）污染其它杂菌 有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。 有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使pH下降，使不耐酸的产品破坏。污染芽孢杆菌耐热，不易杀死。 3、污染程度的危害 染菌程度越大，意味着进入发酵罐的杂菌数量越多，对发酵生产的危害越大。 染菌程度的危害性必须结合染菌时间、杂菌种类、发酵周期等来综合分析。 二、染菌的异常现象 1、种子培养异常 菌体生长缓慢；菌丝结团；代谢不正常；显微镜观察菌种有异常。 2、发酵过程异常： 菌体生长差；pH异常；溶氧异常；泡沫过多；菌体浓度异常 三、染菌的途径 发酵过程中造成发酵染菌的原因很多，各种染菌途径一般归纳为四个方面： ①菌种或一级种子不纯；②生产设备和工艺管路存在隐患；③生产操作不当；④操作环境条件差； 1、菌种或一级种子不纯 （1）菌株本身不纯：主要指保藏菌种和斜面菌种不纯。获取的菌种不纯，而又未能及时、有效的进行分离纯化，是发酵染菌最大的隐患。 （2）一级种子不纯：氨基酸发酵中主要指摇瓶种子不纯。 检查方法：镜检法、划线法、稀释培养法； 2、生产设备与工艺管路存在隐患 （1）空气除菌设备的隐患：空气除菌流程；空气过滤设备的设计；过滤介质的选用、装填及灭菌；这些方面都必须使除菌效率达到要求。 2、生产设备与工艺管路存在隐患 （2）培养基灭菌设备的隐患：培养基灭菌设备包括二级种子培养基、发酵培养基及所有补加料的连消设备与实消设备。 2、生产设备与工艺管路存在隐患 （3）培养设备的隐患：包括种子罐、发酵罐。发酵罐设计或安装不合理，存在空消、实消的死角； 2、生产设备与工艺管路存在隐患 （4）管道与管件的隐患：管路设计、安装不合理，存在管路灭菌的死角；法兰、阀门连接不紧密等。 3、生产操作不当 （1）灭菌操作不当：培养基的灭菌；设备的灭菌；管路的灭菌①培养基的灭菌：种子培养基、发酵培养基以及所需补加的物料需要灭菌。 操作：灭菌温度、灭菌时间达不到要求；有些进气排气阀门没有按要求打开通达空气，造成死角。其他操作。 （1）灭菌操作不当：  ②设备的灭菌：过滤器与过滤介质的灭菌、培养基连消设备、种子罐、发酵罐、贮料罐等的空消。 操作：灭菌温度、灭菌时间达不到要求；有些进气排气阀门没有