明胶胶体金探针及胶体金标记明胶阿拉伯胶空微囊的制备论文.pdf

明胶胶体金探针及胶体金标记 明胶．阿拉伯胶空微囊的制备 王秀珍弭忠祥刘利萍陈荧燕 (绍兴文理学院，浙江绍兴312000) 蛋白质、糖的复合物已用于组织细胞定位方面的研究、某些物质在机体代谢中转动方式的研究、 在病理方面的研究和分子生物学方面的应用；从结构上，胶体金表面带负电荷而壳聚糖、明胶等 微囊材料表面带正电荷，它们之间可形成非共价健的静电吸引而牢固结合，所以以明胶为微囊囊 材，使之先与胶体金特异结合，然后再用标记过的囊材制各微囊，动物给药后，不同的时间取动 物的不同组织和脏器，电镜观察胶体金的分布就可得到胶体金标记微囊在体内的分布情况。胶体 金技术与荧光素标记法相比较，具有制作方便、价格低廉、容易操作、无放射性污染等优点；胶 体金技术与血、组织药物浓度测定法相比较，大大提高了准确性并简化了实验操作，把电子显微 镜的胶体金技术应用于研究药物体内分布方面，将是药物研究方法的一大进步，对药动学具有重 要意义。本实验摸索了在我们实验室条件下，明胶胶体金探针的制备和胶体金标记明胶～阿拉伯 胶空微囊的制备。 1材料与方法 1．1胶体金制备 后迅速加入4ml 1％柠檬酸三钠水溶液，继续加热，约5分钟后出现橙红色。这时制得的胶体金 颗粒直径约为15rim。颗粒直径大小依柠檬酸三钠用量减少而增加。凉至室温后，置60C冰箱保 存备用。 1．2胶体金撵针制各及最少明胶用量的确定 取10支试管，分别加入上述用柠檬酸三钠法制备好的胶体金溶液1mL，然后加入稀释好的 后，各管加2d 10％NaCl溶液，静置2h，透射电镜观察胶体金标记状况”“”。 1．3胶体金微囊制备 1．3．1用胶体金标记明胶：取11．59明胶溶液(30％)放入锥形瓶中，在40”C下加热，并用 K2C03调pH=9。 1．3．2胶体金标记微囊的制备：在标记过的明胶溶液中加入2．59液体石蜡形成乳状，然后再 加入1 中40℃加热。搅拌期间，用lO％醋酸溶液调pH值至4．5。这时候形成了凝聚囊。然后放在冰箱 调pH至9，成固化囊。然后用水洗至无甲醛，此时形成胶体金标记的微囊。在日本电子JEM一1011 透射lU镜下观察微囊内胶体金状况。 2结果与讨论 000001 在1．2实验结果中只有对照管、O 0000l g／mL、0 g／mL变成蓝色，其余各管仍娶红色。 电镜观察胶体金粒径5．10n m，与明胶结合被吸附在明胶胶团表面，胶体金颗粒没有全部被吸 附(图2)。在透射光下，直径小于80微米的球形颗粒通常呈红色，若颗粒大且不呈球形则为蓝 色。当金属颗粒聚集在一起时也可表现为蓝色：胶体金溶液在可见光谱范围内的吸收峰值为 520-54(mm；电解质溶液可引起胶体金的凝聚，而明胶溶液可以保护胶体金不受电解质的影响。 也就是说，由于明胶的保护，即使加入盐溶液，胶体金也不会从红色变为蓝色。实验结果说明明 胶能与胶体金特异结合．保护胶体金免于絮集，保护lmL胶体金的最少明胶用量为O．000029／mL。 圈}胶体金标记明胶．阿拉伯胶微囊。Bat=200m 图2胶体金与明胶结台被吸附在明胶胶团表面。Bar=100I-m 此外，明胶是两性电解质，在水溶液中分子上有_NH3和．COO。但所含正负离子的多寡受 介质口H值的影响。在到达一定pH值时这两种荷电相反的基团数目相等。酸法明胶等电点为 分子上的一COO-，故荷负电，反之，在等电点以下时，因抑制了-COOH的介离，分子上相应的-NH- ，+增多故荷正电。因此，只需调节溶液的pH值就可使明胶分子或荷正电或荷负电”“…。当}碉胶 加入胶体金溶液时，调节pH9，是由于在此p_H下明胶两种荷电相反的基团数目基本相等，而胶 体金探针在此条件下最易形成；胶体金对明胶的吸附主要取决于pn值，在接近明胶的等电点或 略偏碱的条件下，二者易形成牢固的结合物：如果胶体金的pH值低下明胶的等电点时．则会聚 集而失去结合能力。所以制备过程必须掌握好pH值。 m，囊壁内有标记的胶体金颗 1．3的实验结果显示：微囊粒径0．5—51／m，囊壁厚度50．1