pcr是穆里斯的.pptVIP

; 利用DNA芯片技术，将大量探针固定于玻/硅片上，然后用荧光标记样品进行大量分子杂交，以比较不同组织或器官的基因表达水平，筛选突变基因，分析基因表达模式。 优点：密度高、制作方便，解决了传统核酸杂交技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、低通量等不足;产生信号（Signal Generated）;;Hybridization Based Marker- VNTR;Principle of VNTR Analysis;*;PCR（聚合酶链式反应）;;;Kary Mullis; 类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。;Template denaturatation Primer annealing Primer extension;Principle for PCR;Curve of PCR Reaction;上样;PCR Reaction System;Principle for Primer Design (1);④避免引物内部出现二级结构 避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条带 ⑤引物 3’端的碱基要求严格配对 特别是最末及倒数第二个碱基，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处;Taq DNA Polymerphase;Taq DNA Polymerphase;Taq DNA Polymerphase;Quality and Concentration of dNTP;Template（target gene）;Concentration of Mg2+;Optimization of PCR reaction;Temperature Time Setting;Primer Annealing Temperature;延伸温度：一般选择在70～75℃之间 常用温度为72℃ 过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。 延伸反应时间：根据待扩增片段长度而定 1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min（足够） 3～4kb的靶序列需3～4min 扩增10Kb需延伸至15min 延伸进间过长会导致非特异性扩增 对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些;Cycle Numbers;Advantages of PCR;Factors Effecting PCR Speciality;High Sensitivity;Simple and quickly;PCR-based Markers RAPD, SSR, etc.;PCR Based Marker—RAPD;Principle of RAPD;RAPD操作;Step1 95℃ 2分钟 Step2 95℃ 15秒 Step3 36℃ 30秒 Step4 72℃ 45秒 Step5 GOTO Step2 46循环 Step6 72℃ 5分钟 ?;;RAPD标记;优点： --实验步骤少，省工、省力、进度快 --不需先知道基因组的任何分子信息 --所用材料不需有性世代，可用任何单一亲本 --引物具有广泛性和通用性。;SSR: Simple Sequence Repeat，简单重复序列，又称微卫星DNA （microsatellite）或短的串联重复（Short Tandem Repeat, STR)。 微卫星DNA：一类由几个核苷酸（一般1-5个，基序很短）为重复单位串联而成的DNA序列。微卫星DNA广泛存在于真核生物中，人和动物（TG）n，植物（AT)n微卫星DNA长度的多态性;微卫星DNA两端多是高度保守的单拷贝序列。;微卫星DNA的类型;Types of Microsatellites; 根据两端序列的保守性设计引物进行PCR，电泳分离，染色显带以检测微卫星序列多态性。;Where Are Microsatellites？;SSR marker Development;基于生物信息学;Procedures for SSR;SSR Marker Applied in Citrus;SSR标记的优点;SSR标记的缺点;*;Brief on AFLP;Principle of AFLP;①