DNA粗提取与鉴定实验剖析.ppt

特别提醒 (1)做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟 的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。 (2)制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止 血液凝固,静置后上层是血浆，下层为所需要的血细胞。 (3)涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液 的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。 不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度 相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。 (4)两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破,释放 出核内的DNA；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA 的析出。 (5)两次析出DNA的方法： 第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出； 第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的 或 方法分离具有不同_______________ 的生物大分子。 2.提取DNA的思路：利用DNA与 、 和 等在 和 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 一、提取DNA的方法 物理 化学 物理或化学性质 RNA 蛋白质 脂质 物理 化学 DNA粗提取与鉴定 回扣基础知识点 3.原理 (1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的 就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 NaCl 盐浓度 (2) 能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受 的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能瓦解 ，但对DNA没有影响。 (3)DNA不溶于 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。 酒精 蛋白酶 60～80℃ 80℃ 细胞膜 4.DNA的鉴定 在 的条件下，DNA遇二苯胺会染成 。注意二苯胺试剂要 。 沸水浴 蓝色 现配现用 通常选用2 mol/LNaCl溶液溶解细胞中的_________，此时杂质易沉淀；在0.14 mol/LNaCl溶液中DNA溶解度_______，可使_________。 DNA 最小 DNA析出 1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA ①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 溶解特性 质量浓度为2 mol/L NaCl溶液 质量浓度为0.14 mol/L NaCl溶液 DNA 在NaCl溶液中，质量浓度为0.14 mol/L时溶解度最小 溶解 析出 蛋白质 NaCl的质量浓度从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大 部分发生盐析 溶解 考点一 DNA提取与鉴定原理 ②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。 NaCl溶液 酒精(体积分数为 95%的冷酒精) DNA 不溶 蛋白质 NaCl溶液质量浓度从2 mol/L逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大 某些蛋白质可溶 思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在 质量浓度为2 mol/L NaCl溶液及0.14 mol/L NaCl溶液中应取 滤液，还是滤得的固体物？ 在质量浓度为2 mol/L NaCl溶液中DNA呈溶解状态，应取滤 液，在质量浓度为0.14 mol/L NaCl溶液中DNA溶解度极低， 易析出，应取固体物。 2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表) DNA 蛋白质 蛋白酶 没影响 水　解 高温 80 ℃以上才会变性 60～80 ℃会变性 洗涤剂 没影响 瓦解细胞膜 特别提醒　 (1)甲基绿可将DNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要水浴加热5 min，可使DNA呈蓝色。 (2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。 归纳 DNA的粗提取原理及目的归纳 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶 液中并稀释 ①NaCl溶液质量浓度为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至质量浓度为0.14 mol/L时，DNA析 出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒 精(体积分 数为95%) DNA析