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第二章 气相色谱法 高效液相色谱: 流动相：液体 固定相：柱子采用十分细小的颗粒填充 高效分离柱（40000 ～ 60000块/m） 高压泵输送流动相（100～350x105Pa） 高灵敏度检测器（如荧光10-11g） 高速（一般分析时间少于1h） 高效液相色谱的特点 气相色谱法与高效液相色谱法比较 高 压 目的：输送流动相及组分，保持渗透性和快速分析。 高压输液泵: 密封性，输出流量恒定，压力平稳，可调范 围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀。 装 置：双活塞往复泵：稳定输出流量， 压 力：100～350×105 Pa。 输液泵分类: 恒流泵和恒压泵。 100% propanol 80% propanol 20% water 60% propanol 40% water 40% propanol 60% water 色谱柱短，柱外展宽（又称柱外效应）较突出。 柱外展宽: 是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽 原因：进样系统、连接管道及检测器中存在死体积 柱外展宽分: 柱前和柱后展宽 进样系统是引起柱前展宽的主要因素。 进样方式： 流路中为高压力工作状态， 使用耐高压的六通阀进样装置 材料：内部抛光不锈钢管 外型：内径：4.6mm 3.9mm 柱长：5cm ～ 30cm 高效：填料粒度小：5~10μm 塔板数：7 000 ～10 000 要求：灵敏度，噪音低、线性范围宽、响应快，死体小、池体积小于15微升 溶质性检测器: 仅对被分离组分的物理或化学特性有响应: 总体检测器: 对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应: 光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，照射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。 17.4 高效液相色谱法主要分离类型 液-液分配 色谱法（LLPC） 化学键合相色谱法（CBPC） 液-固吸收 色谱法（LSAC） 离子交换 色谱法 （IEC） 尺寸排阻 色谱法 （SEC） 选择色谱分离方法的主要根据： 样品的相对分子质量的大小， 在水中和有机溶剂中的溶解度， 极性和稳定程度 化学结构等物理、化学性质。 应用 中等分子量的油溶性样品 如油品、脂肪、芳烃等 不同极性取代基的化合物 结构异构体和几何异构体混合物的分离 1.分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。 2.类型： 据固定相状态分 （1）液 液 色 谱：固定相是通过物理吸附方法将液相固定液涂在载体表面。 缺点：物理浸渍的液体固定相，由于流动相的溶解作用或机械作用易流失，导致柱上保留行为改变。 （2）键合相 色谱：固定相通过化学反应将有机分子键合到载体或硅胶表面上。 按固定相与流动相极性分 3.流动相选择： 常用溶剂：己烷/甲醇/乙腈/水/乙酸乙酯/乙醇/四氯化碳 常用溶剂的极性顺序： 水(最大)乙腈甲醇乙醇四氢呋喃正丁醇己烷煤油 二元或多元组合溶剂:调节流动相的极性或增加选择性， 以改进分离或调整出峰时间。 4.固定相： 载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 （1）表面多孔型固定相 基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。 （2）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成； 化学键合相色谱法 涂渍固定液 化学键合固定相:化学反应通过化学键将固定液结合在担体表面。 键合相色谱法：采用化学键合固定相的液相色谱法 固定相的结构：载体或担体（基质)+功能层 分类 化学键合相 反相键合相色谱 正相键合相色谱 离子对色谱和离子抑制色谱 分离机制： 分配 + 吸附 （以LLC为基础） 特点： 1）不易流失 2）热稳定性好 3）化学性能好 4）盛载载样量大 5）适于梯度洗脱 离子交换色谱（IEC） 适 用： 无机离子混合物的分离/有机物的分离 例 如：氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。 1.离子交换原理: 组分在固定相上发生反复离子交换反应；不同待测离子对固定相亲和力存在差