植物组织培养教案—— 脱毒苗的鉴定.docVIP

植物组织培养教案?脱毒苗的鉴定 ???????????? 课程__植物组织培养__????? 200 /200? 学年第_ __学期???????????? 教师_____ ??? 授课日期 ? ? ? ? ? ? 班??? 级 ? ? ? ? ? ? ? ? 课??? 题：??????????? ???脱毒苗的鉴定 ? ?教学目标：、了解脱毒苗鉴定的意义；掌握脱毒苗鉴定的方法；掌握无病毒原种的保存方法及繁殖程序；能熟练、正确利用所学对脱毒处理获得无病毒苗进行鉴定和繁殖；重点难点：无病毒苗的含义、特点；热处理脱毒和茎尖脱毒原理和脱毒的技术 教学重点难点：指示植物鉴定的方法、血清学鉴定的方法；无病毒原种的保存方法及繁殖程序 ? ?教学方法：课堂讲授 ? ?教??? 具：多媒体教学 ?教学参考书：《植物组织培养》 ? 课后作业： ? ?中职教学资源网 教学札记： ? ? ? ? ? ? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ?编写日期： ? 教案附页 ? 一、脱毒苗的鉴定 （一）脱毒苗鉴定的意义 （二）脱毒苗鉴定的方法 1、直观测定法 直接观察待测植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而判断病毒是否存在。 特点：可见症状需要长时间；敏感度不够 2、指示植物法 指示植物：是指对某种或某几种病毒及类似病原物或株系有敏感反应，并表现明显症状的植物。 （1）指示植物法的意义 ????? 确认一种病毒类病原物在症状不明显或不确定的植株中存在； ????? 用于检测隐形病毒的存在或某些品种的隐形病毒，确定无病症的植株上是否存在病毒； ????? 标记病毒复合物的存在以及鉴定病毒。 （2）指示植物的要求 ????? 指示植物对所指示的病毒类病原物敏感 ????? 指示植物对所指示的病毒类病原物专一 ????? 表现症状快 ????? 易于繁殖 （3）指示植物法的类型 汁液鉴定法（草本指示植物法）：脱毒处理再生植株幼叶1-3克，在研钵中加10ml水及少量磷酸缓冲液（0.1M，pH7），研磨，过滤，在指示植物叶片上产生小伤口，滤液在叶片伤口涂抹2-3次，清水冲洗，15-25保温2-6天，产生病斑就未脱毒，不产生病斑则脱毒。 嫁接鉴定法（木本指示植物法）：一般采用双重芽嫁接或双芽嫁接，先将指示植物的芽嫁接到实生砧木基部距地面10-12cm处，再在接芽下方嫁接待检植物芽，两芽相距2-3cm。成活后剪去指示植物芽上部砧木。 （4）特点：简单易行，成本低；但灵敏度低，持续鉴定时间长。 3、 抗血清测验法 （1）原理： 已知植株病毒接种在动物体内产生抗体，抗体和酶（过氧化物酶、磷酸酶）结合形成酶标复合物，待检测样品（含病毒抗原）与酶标复合物结合，加入酶的反应底物，在酶的作用下反应，肉眼或比色反应判断有无某种病毒 （2）步骤（以马铃薯病毒为例）： （3）特点 ?????? 灵敏度高1-10ug/ml ?????? 反应时间短6-24hr ?????? 反应物用量少，每ml抗血清可测定10000个样品 ?????? 工作效率高中职教学资源网 ????? 可以进行定量测定 4、电镜观察法 ?????? 电镜下直接观察病毒 ????? 依据：不同种类病毒其大小、形状不一样 ?????? 特点：灵敏度高，但所需仪器成本过高， 5）免疫电镜法 ?????? 1970年发展起来的电镜结合血清学检测方法，称为陷入法（trapping）或免疫吸附电镜(immunosorbent electron microscope, ISEM）。 ?????? 其基本过程：少量稀释抗血清加到电镜铜网的膜上，孵育约30min，一层血清抗体蛋白质就被吸附在膜上，除去过量蛋白质，加入一滴病毒悬浮液或感染组织的提取液，1-2h后原来吸附在铜网上的抗体陷入同源的病毒颗粒上，在电镜下即可见到病毒粒子。 二、无病毒苗的保存 1、? 隔离保存? 将无病毒原种苗种植于防虫网室、盆栽钵中保存。 2、? 长期离体保存 1）? 低温保存 2）? 冷冻保存 二、无病毒苗的繁殖 2