dna分析在法齿学的应用 - 全斌牙医诊所.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 紅色DNA片段的 peak 是內部標準的DNA標記﹝sizemarker﹞。 這個 typing kit 除了 STR基因位之外，也利用 Amerogenin 基因作性別檢定，本案例結論是女性。 87-3 用這個方法檢定180名日本人的 15個基因位的 STR基因型，藉以推測各個基因位對偶基因的頻率。 其中如圖所示，第八基因位上 D18S51、PentaE的對偶基因很多，有很多的多型性。 88 這是其他七個基因位的結果。 FGA、D8S1179基因位有很多多型性。 D21S11基因位對偶基因較多，但分佈不均，缺乏多型性。 將這15個基因位的STR，比較日本人、美國白人與黑人之對偶基因頻率，發現所有的基因位都有1%的危險機率(有意義)。 89 為了評估本法在法醫學上人身鑑別的有效性，我們計算這15個基因位的STR人身鑑別的能力指標，例如 heterozygosity值、多型資訊量PIC值、識別力PD值與 matching probability pM值。 結果，heterozygosity值以PentaE為最高﹝0.904﹞， 0.678~ 0.904。PIC值為 0.587~ 0.904，PD值以PentaE 最高﹝0.981﹞，其他的基因位都在0.80以上。另外基因型偶然一致的機率，pM值為0.20~0.019，換言之，1/5 ~ 1/50。 90-1 結果，heterozygosity值以PentaE為最高﹝0.904﹞， 0.678~ 0.904。PIC值為 0.587~ 0.904，PD值以PentaE 最高﹝0.981﹞，其他的基因位都在0.80以上。另外基因型偶然一致的機率，pM值為0.20~0.019，換言之，1/5 ~ 1/50。 90-2 從以上統計可以確認，這15個基因位的 STR多型，其人身鑑別的能力都相當高。 另外，這15個基因位同時檢查時的人身鑑別能力，出現同型之可能性的pM值，推測為 1.37 x 10-17，這表示刑事鑑定上本方法很有效。 90-3 以下，我們再將 ﹝Slide 74﹞白骨化頭顱作STR的人身鑑別。前述按X、Y特定排序判斷為男性的頭顱，年齡大約 30~50 歲，可能40歲左右。 91 另外和警方搜查到的疑似失蹤者的大頭照作 superimpose，發現有可能是同一人，但不完全確定，因此決定嘗試牙齒STR多型檢查。 92 從﹝白骨化頭顱﹞上顎殘存臼齒取出DNA作檢定，另外請疑似失蹤者的父親合作，提供血液，比較兩者之 DNA型，發現兩者在所有的基因位中至少有一個對偶基因是共有的，視為父子並不矛盾，計算兩者間的親子關係確定率，得到 0.99953。 因此結論是，失蹤的男性和水溝中發現的頭顱是一致的。 93 如同以上所介紹，這次所用15個基因位STR多型同時檢定法，使用 multiplex PCR與capillary 電泳，不但簡便，鑑別能力與檢定效率也都很好，對於法醫學上人身鑑別與親子鑑定極為好用。 94 以下要介紹粒線體的DNA分析，如何應用在法醫學與法齒學。 人類粒線體DNA是16,569個鹽基對的雙鏈環狀DNA，1981年Anderson等人將所有的鹽基序列都解碼出來。粒線體DNA不同於核中染色體的DNA，以人類為首的高等動物的粒線體DNA只有母系遺傳﹝細胞質遺傳﹞，因此用於母子鑑定與人身鑑別相當好用。 95-1 和染色體DNA相較之下，粒線體DNA的鹽基置換速度快 5~10 倍，個體差異更大。細胞內粒線體有數百個至數千個，但細胞核卻只有一個，因此比染色體DNA檢查的成功機率更高。粒線體DNA的鹽基序列中，所謂的 D-loop區，其個體差異特別大，因此該區鹽基序列的檢查法得以應用在法醫學上的母子鑑定與人身鑑別。 95-2 我們採用 Horai等人所提出的粒線體DNA D-loop區， 將鹽基序號16,209~ 16,402 之 194bp DNA片段的鹽基序列，以PCR複製的直接定序法( PCR direct sequencing 法)。 大概的方法，如圖所示。 96 這是將粒線體DNA D-loop 鹽基序號16,209 ~ 16,402 定序﹝sequencing﹞的案例。 97 我們調查了 51個日本人，按不同鹽基序列的出現順序，給予一個型號，一共得到 31個Type。 Type 2和 Type 6的出現頻率較高，總而言之，粒線體DN