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2004年3月 重庆 大学学报 Mar．2004 第27卷第3期 Journal of Chongqing University V0I．27 No．3 文章编号：1000—582X(2004)03—0100—04 用AFM研究杜仲抗真菌蛋白的晶体生长 汪 盛 ，向 烨 ，蔡绍皙 ，王大成 (1．重庆大学生物工程学院，重庆 400030；2．q-国科学院生物物理所，北京 100101； 3．中国科学院力学所国家微重力实验室．北京 100080) 摘 要：随着后基因组时代的到来以及蛋白质组学研究的深入开展，研究蛋白质晶体生长成为生物化 学和结构生物学领域一个广泛关注的课题。通过使用原子力显微镜(Atomic Force Microscope，简称 AFM)对杜仲抗真菌蛋白(eucommia antifungal protein，简称EAFP)的晶体在有母液存在下原位实时动态地 进行了晶面生长观察。研究结果表明：不同过饱和度对EAFP晶体生长形貌的影响较大，较高的过饱和度 下生长很快，生长台阶密度高，较高的过饱和度下主要进行各向异性二维台阶的发生、发展，较低的过饱和 度下主要采用螺旋位错的生长方式，当过饱和度极低时生长缓慢，且晶体表面有很多小孔存在，晶面生长 很不完整；还对不同过饱和度下晶体生长速率进行了定量的测量，也反映了过饱和度对EAFP晶体生长的 影响；同时对在AFM观察过程中由探针的扫描速度和方向对表面形貌的影响进行了讨论。 关键词：晶体生长；杜仲抗真菌蛋白；原子力显微镜；生长台阶 中图分类号：0793 文献标识码：A 自从1986年Binnig等人首次利用原子力显微镜 显微镜来进行生物大分子晶体生长的研究是最有效的 (AFM)在溶液里得到固体材料表面的高分辨率的图像 方法之一。为了研究EAFP蛋白质晶体生长，笔者利 以来，AFM这一技术得到了广泛的应用¨ 。随后，在 用原子力显微镜(AFM)对EAFP晶体进行了有母液存 1992年Durbin等人首次对在有母液存在下溶菌酶晶体 在下的原位实时动态观察，以弄清蛋白浓度对晶体表 表面台阶生长情况进行了报道，从而使得AFM开始进 面形貌的影响。 入到蛋白质晶体的研究领域 j。近年来，这一技术得到 越来越广泛而深入的应用，现已用于生物大分子(蛋白 1 材料和方法 质，核酸和病毒及其复合物)的晶体生长研究，包括生物 大分子晶体生长中的杂质的影响 J、生长的缺陷结构问 1．1 仪器和试剂 题 及控制晶体生长的机理的有关问题 ，并取得了 原子力显微镜：AutoProbe CP Research Scanning 很大的进展。随着后基因组时代及蛋白质组时代的到 Probe Microscope(Park Scientific Instruments)；UV一 来，以蛋白质为中心的生命科学时代将走上历史舞台， 120—02型紫外分光仪(Skimadzu corp．Kyoto Japan)； 以生物大分子晶体生长为基石的结构生物学将显得尤 Park公司生产的超尖的microlever C针(0．01 N／m， 为重要 J。这就使得研究生物大分子的晶体生长成 Park Scientific Instruments)；数据收集及图像处理软 为今后生物学领域里的一个重要课题。 件：Data Acquisition(1．6 beta)、IP 2．1和ThermoMicro— 由于生物大分子在许多方面具有独特的性质，在 scopes SPMLab NT Ver．5．0 1(Copyright 2000 Thermo— 成分、结构、表面特点和表面势能上都相当复杂，并且