毒理指导原则.docVIP

皮肤长期毒性试验（讨论稿） 一、试验目的 观察动物皮肤长期接触受试物后，经皮肤渗透对局部和全身是否产生毒性反应及其严重程度，并提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量。 二、试验材料 （一）受试物：膏剂、液体可直接试验，固体粉末需用适量的水或适宜的赋形剂（如羊毛脂、凡士林和橄榄油等）混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触。 （二）动物 1. 种属与品系：选用成年健康合格的白色家兔、白化豚鼠或大鼠，雌雄各半。体重以家兔2.0~3.0kg，豚鼠250~350g，大鼠150~200g为宜。 2. 饲养管理：单笼饲养，所有动物试验前至少观察5天。对于啮齿类，动物室的温度为22+3OC，对于家兔，应为20+3OC，相对湿度50~70%。人工照明时，12/12小时明暗交替。一般情况下，用常规颗粒饲料和饮用水。 3. 给受试物前处理：给受试物前24小时将动物背部脊柱两侧毛去除（以剪毛法或剃毛法为宜），一般间隔1周，需再剪剃1次。去毛范围相当于体表面积的10~15%（家兔约150cm2，豚鼠、大鼠约40cm2）。去毛后24小时，检查确认去毛区皮肤无损伤时，方可应用于皮肤长期毒性试验。 三、试验方法 1. 剂量选择：一般选用3个剂量组和1个空白对照组。必要时，应设1 个赋形剂对照组。各剂量组的要求与大鼠口服长期毒性试验相同。若用受试物剂量超过1000mg/kg或达有效浓度20倍以上，仍未见动物呈现毒性反应及死亡时，可仅设一个高剂量组，如果敷用受试物后，产生了严重的皮肤刺激，造成皮肤损伤，则应考虑降低药物浓度，重新进行一次新的试验。 2.给受试物方法：给受试物前将动物称重，计算给受试物剂量，按每cm2 0.05~0.1ml(g)涂敷给药。试验时，将受试物均匀地涂敷于已处理好的动物去毛区，先用略大于涂布面积的无刺激性纱布紧贴动物试验部位，上盖一层油布或油纸，再用绑带和橡皮膏加以固定。每天一次，每次接触受试物至少6小时后，用温水或无刺激性溶剂除去残留的受试物或赋形剂。按临床用药疗程的3倍以上时间连续给药。最好是每周7天连续给药，每天给药时间应相同。部分动物应于停药后继续观察2~4周，以便确定受试物毒性可逆反应程度。 3. 动物观察：每天至少一次，记录所观察到的中毒现象，包括皮肤、毛、眼睛、粘膜、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动和行为方式等的变化及其出现时间、程度、持续时间。发现濒死或死亡动物时，应及时称重并进行病理组织学检查。每周测量进食量和体重。 4. 检测项目：血液学、血液生化、尿液分析和病理学检查项目及要求均与大鼠长期毒性试验要求相同。病理学检查应包括给药部位皮肤。 四、结果判断与评价 报告逐日的皮肤状况、全身症状，详细记录中毒表现、中毒恢复程度、死亡动物数及病理学检查结果，写明安全剂量或中毒剂量、中毒靶器官及中毒的可逆程度等。 皮肤刺激试验（讨论稿） 一、试验目的 观察动物完整皮肤及破损皮肤接触受试物后所产生的局部刺激 反应。 二、试验材料 （一）受试物：膏剂、液体可直接试验，粉末需用适量的水或适宜的赋形剂（如羊毛脂、凡士林和橄榄油等）混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触。 （二）动物 1. 种属与品系：选用成年健康合格的白色家兔、白化豚鼠，雌雄各半。体重以家兔2.0~3.0kg，豚鼠350~450g为宜。 2. 饲养管理：单笼饲养，所有动物试验前至少观察5天。对于豚鼠，动物室的温度为22+3OC，对于家兔，应为20+3OC，相对湿度50~70%。人工照明时，12/12小时明暗交替。一般情况下，用常规颗粒饲料和饮用水。 3. 给受试物前处理：给受试物前24小时将动物背部脊柱两侧毛去除（以剪毛法或剃毛法为宜），去毛范围相当于体表面积的5~10%（家兔每侧约50cm2，豚鼠每侧约20cm2）。去毛后24小时，检查确认去毛区皮肤无损伤时，方可应用于完整皮肤刺激试验。破损皮肤的制作采用适宜方法将去毛消毒后的皮肤划破，以渗血为度。 三、试验方法：采用同体左右侧自身对比，分完整皮肤组和破损皮肤组，每组家兔3~4只或豚鼠5~6只，在左侧去毛区约15cm2皮肤上一次或多次涂敷适宜浓度（原液和/或临床浓度）的受试物1ml (g)，右侧去毛区涂赋形剂作为对照，用略大于涂布面积的无刺激性纱布紧贴动物试验部位，上盖一层油布或油纸，再用绑带和橡皮膏加以固定。接触受试物4~24小时内的适当时间后，用温水或无刺激性溶剂除去残留的受试物或赋形剂。观察期以能充分估计反应的可逆性或不可逆性为准，一