人粘蛋白粘液素 5AC(MUC5AC) 酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书.pdf

人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E0756h 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定人细胞培养上清或其它相关生物液体中MUC5AC 含量。 实验原理 用纯化的MUC5AC 抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生 物素化的MUC5AC 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB 在过氧化 物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和 品中的MUC5AC 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（ 值），计算 品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、 酶标板：一块（96 孔） 2、 标准品 （冻干品）： 2 瓶，请临用前 15 分钟内配制。每瓶以 品稀释液稀释至 1ml，盖 好后室温静置大约10 分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 ng/ml，然后做 系列倍比稀释 （注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成50 ng/ml，25 ng/ml， 12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，0.78 ng/ml， 品稀释液直接作 为空白孔 0 ng/ml。如配制25 ng/ml 标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）50 ng/ml 的上述标准品加入含有0.5ml 品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此 类推。 3、 样品稀释液：1×20ml。 4、 检测稀释液A：1×10ml。 5、 检测稀释液B：1×10ml。 6、 检测溶液 A：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释（如：10 检 测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总 量配制 （100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检 测溶液A。 8、 底物溶液：1×10ml/瓶。 9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H SO ）。 2 4 11、覆膜：5 12、使用说明书：1 份 自备物品 1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、 微量加液器及吸头，EP 管 3、 蒸馏水或去离子水，滤纸 标本的采集及保存 1、 细胞培养物上清或其它生物标本：请 1000 g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清 置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。 注：以上标本均应密封保存，4 保存应小于 1 周，-20 不应超过 1 个月，-80 不应超过2 个月； 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在 37 溶解；试剂或 品配制时， 均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓 过高时，应对样 品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 1、 加 ：分别设空白孔、标准孔、待测 品孔。空白孔加 品稀释液 100 ，余孔分别加 标准品或待测 品 100 ，注意不要有气泡，加 时将 品加于酶标板底部，尽量不触 及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2 小时。为保证实验结果有效 性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液 100 （临用前配制），酶标板加 上覆膜，37 温育1 小时。 3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡1-2 分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻 拍将孔内液体拍干）。 4