超低温保存技术的研究进展.pdfVIP

◇本刊特稿◇ 科技一向导 2012年第27期 超低温保存技术的研究进展 侯晓杰 f衡水学院 河北 衡水 053000) 超低温保存是指在一8O℃以下的超低温中保存种质资源的一套生 分三个步骤．材料先在含低温保护剂的培养基上预培养．然后进行干 物学技术。超低温保存介质或容器有干冰(一79~C)、超低温冰箱(一8O℃ 燥．最后浸入液氮进行保存。 一 150 、液氮(一196~C)7fll液氮蒸汽相(一140~C)等，其中液氮最为常用。 玻璃化法 ：基本过程是将生物样品用一定配方的玻璃化法保 超低温保存(cryopreservation)技术是 目前唯一可行的、不需继代的长 护剂处理后快速投入液氮贮存 Langis等_l2嘬先报道．可用于细胞 期保存方式 悬浮系、顶端分生组织 、胚状体、原生质体等多种外植体的超低温 1．超低温保存原理 保存。 生物细胞在降温过程中，随着温度的降低，细胞外介质结冰，而细 包埋脱水法：Fahy等 1990年首次报道，该法就是将茎尖、分生组 胞内尚未结冰．造成细胞内外蒸汽压力差。只要降温速率不超过脱水 织和体细胞胚等样品用褐藻酸钙包埋后．先在含高浓度蔗糖的培养基 的连续性．细胞 内的水不断向细胞外扩散 ，细胞原生质浓缩 ．从而降低 中脱水 ．再用干燥硅胶和无菌气流脱水，然后投入液氮贮存[133。最常用 细胞内含物的冰点．这种逐渐除去细胞内水份的过程称为 “保护性脱 的低温保护剂是蔗糖．也有使用混合低温保护剂的。干燥方法是用硅 水”(Protectivedehydration)[”这种保护性脱水能有效阻止细胞质和液 胶和无菌气流进行干燥 泡中结冰 但过度脱水会使细胞内有害物质积累，蛋白质分子之间形 包埋玻璃化法：是包埋一脱水法和玻璃化法的结合，保存材料用 成二硫键，破坏蛋白质、酶，膜的完整性而受到伤害 。此时，若降温速 藻酸钙包埋后．经蔗糖浓度梯度脱水、玻璃化溶液处理后直接浸入液 率加快f10℃m／in以上1．细胞内就产生大量冰晶．导致细胞死亡3[1。但 氮保存 包埋玻璃化法保存效果好 ．易于操作，脱水时间较短，成苗率 是，如果降温速率非常快，细胞质溶液 “固化”，但仍保持非结晶状态 ， 高，克服了玻璃化法和包埋脱水法的缺点。I 这种现象称为 玻“璃化”，对细胞不构成直接伤害。从理论上说 ，细胞 内含物一旦发生玻璃化．就能避免细胞内结冰 参【考文献】 2．超低温保存方法 [1]MerymanHT，WilliamsRJ．Basicprinciplesoffreezinginjurytoplantcells： 2．1冷冻诱导脱水的超低温保存法 naturaltoleranceand approachesto cryopreservation，In：Cryopreservation otplant 冷冻诱导脱水又称保护性脱水．这种脱水方法最早用于种质资源 cellsnadorgans，P．13-48．Florida，USA：C．R．C．Press． 超低温保存。保护性脱水结合冷冻保护剂处理主要在经典法、简化法 [2]陈品良．植物组织培养物的超低温保存 J【】．武汉植物学研究，1989，7(4)：390～ 和滴冻法中得到应用 398． 经典法：保存程序包括低温保护剂处理、两步法冷却、液氮保存、 [3]徐刚标．植物种质资源离体保存研究进展J[]．中南林学院学报，2000，20(4)：81～ 迅速化冻和恢复生长