抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究.pdfVIP

盈盔越 !塑塑兰匝塑丑 抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究 周向阳1’2 邓汉超1，2 刘玉琛3 邓国标3’4 刘 晋1，2 陈惠芳1’2杨启鹏1，2 (‘深圳市农业科技促进中心，深圳518040；2农业部农作物种子质量监督检验测试中心(深圳)，广东深圳518040； 3深圳市作物分子育种研究院，深圳518107；4广东省龙门县卫生和计划生育局，惠州516800) 摘要：利用组织研磨仪快速处理水稻种子样品，采用高通量的磁珠纯化系统提取样本DNA，提取的核酸通过紫外吸收检测 其纯度，应用普通PcR检测方法和实时荧光PcR方法对水稻内源基因删、靶基因爿尉用进行检测。结果表明，普通PcR方 法和实时荧光PcR方法均表现快速、准确、特异性高的特点。 关键词：普通PCR；实时荧光PCR；转基因 转基因作物的大量种植和推广同时对转基因生 酸提取试剂盒、Premix 物的检测技术提出要求，发达国家的转基因及相关 光光度计、BIO—RADicvcler 检测技术远远超过发展中的国家。美国、加拿大等国 实时荧光PcR扩增仪、RAININ edp3p11Js排枪(12 已有近百种转基因食品上市，并且他们的目标是把 通道)等。 大量的转基因食品出口到发展中国家n。3]。在这些正 1．2方法 式获批进行生产和贸易的产品之外，更有数目众多 1．2．1样品处理水稻种子取5粒，置于2mL离 sLx 的品种处于试验阶段或未经正常手续进入市场，我 心管中，放人1粒陶瓷珠，加入500乩Buffer 国已经加人WT0，正在面临着转基因产品贸易和安 全监测的挑战。同时随着商品化转基因生物的种类 2％CTAB裂解液，浸泡数小时后采用MP组织研磨 不断增加，转基因生物本身的安全性以及它们对人 仪设置震荡速度4．0M／s、震荡时间30s，震荡粉碎 类健康和生态环境的潜在威胁成为国际社会和广大 5～6次，备用。 民众广泛关注的热点问题之一卜q；包括我国在内的 1．2．2DNA的提取磁珠自动提取法：粉碎样品在 越来越多的国家制定并实施了转基因食品的强制标 识制度。因此，转基因产品的科学管理和应用需要 心lomin。取上清200此于深孑L96平板、800斗L Bur 得到转基因产品及其成分检测技术的支持。追踪转 PHB于深孑L 基因生物研发动态，研发相适应的检测技术，制定相 应的检测标准，是转基因生物安全监管的重要措施。 酸提取试剂盒中的试剂。启动Themo磁珠核酸自 本文以转抗旱基因彳ⅨF，水稻种子为材料，初步建 动提取纯化系统，根据系统提示依次放人上述试剂 立外源基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。板。当DNA提取完毕，取出5号板，将DNA保存在 1材料与方法 一20℃下备用。 1．1 材料本实验室获得的转ATAFl基因水稻 表1磁珠核酸自动提取纯化系统物品 70株，种子保存于本实验室种子低温低湿储藏库中 备用。 主要仪器和试剂：MP组织研磨仪(24样)、 Themo磁珠核酸自动提取纯化仪(96样)、0mega核 基金项目：转基因新品种培育重大专项(2009zx0800l—023B)；深剪 市技术创新项目(Cxzz20120614165508810) 通信作者：刘晋 万方数据 —五：亟至翻 ：!望塑兰 !!!：兰篁!塑 1．2．3 核酸