紫外可见分光光度计介绍与使用.pptVIP

紫外可见分光光度计 主要内容 一 仪器原理 紫外可见吸收光谱主要产生于分子价电子在能级间的跃迁。利用一定频率的紫外--可见光照射被分析的物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。 物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用 偏离朗伯比尔定律的原因-化学因素 朗伯-比尔定律的假设条件一： 入射光为单色光。 朗伯-比尔定律的假设条件之二： 吸收粒子是独立的，彼此之间无相互作用。比尔定律适用于稀溶液。 吸光组分的化学变化： 吸光组分的缔合、离解，互变异构，络合物的逐级形成，以及与溶剂的相互作用等，都将导致偏离比耳定律。 组成：光源、单色器，狭缝、样品池、检测器 1．光源： 　　①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。?钨灯——可见光区 320～2500nm 氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 　　单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是： ①入射狭缝——限制杂散光进入。 ②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。?③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。 ④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。? 3. 吸收池 玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英——适用于紫外和可见光区 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 光电管 光电倍增管 二极管阵列检测器 5．记录装置：讯号处理和显示系统 启动UV Solution软件 打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的[Hitachi Applications]选项中的[UV Solutions 2.0] 选项。或者直接在桌面上双击UV Solution图标。 　2　运行UV Solution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS 232 Port）见图 仪器在初始化过程中进行如下自检工作： ROM检测 RAM检测 波长步进电机运转检测 氘灯点亮检测 钨灯点亮检测 仪器波长校正 3 仪器主机开始初始化。见图 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。 测量参数设置 1 在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。 General:总体设置页面 Measurement测量: Wavelength scan 波长扫描 Time scan　时间扫描 Photometry 定波长测量 Operator操作者: 输入操作者的姓名 Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。 Use Sample Table使用样品表:选择是否使用样品表。 Comments备注:填写一些备注信息。 [Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。 [Save]按钮:保存当前的设置参数。 [Save As]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。 Instrument仪器参数设置页面 Data mode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2 Light一般选择“Auto” Monitor显示页面 Processing数据处理页面 Report报告结果页面 样品名设置，备注信息及文件名输入 基线校正 用户基线校正方法：可将scan speed 设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。 将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮 系统基线校正方法。 使用空气作为参比和样品。按按钮 出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。 测　　量 有两种方法可以开始测量： 使用菜单方式 　选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 使用按钮方式 ：按按钮 　开始测量 如果要终止扫描按按钮 　。 二光度扫描 测量参数设置 在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口. 具体操作程序 Method: general:　Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量） Quantitation定量参数设置页面： 　在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1st order”， “2st order”， “3st ord